细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
7期
703-705
,共3页
杨凡%刘朝奇%柳发勇%张伟%王磊黎
楊凡%劉朝奇%柳髮勇%張偉%王磊黎
양범%류조기%류발용%장위%왕뢰려
HIV-1%Nef%基因表达%抗体%病毒
HIV-1%Nef%基因錶達%抗體%病毒
HIV-1%Nef%기인표체%항체%병독
目的:运用基因工程方法制备HIV-1 Nef重组蛋白及其抗体.方法:用PCR技术从HIV-1 H×B2质粒中扩增HIV-1 Nef基因,将测序鉴定过的HIT-1 Nef基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上,应用酶切鉴定、测序、SDS-PAGE及Western blot等方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性.纯化的重组蛋白免疫兔3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度.用其制备的多克隆抗体通过免疫组织化学方法测定表达Nef基因的内皮细胞.结果:成功地构建了Nef基因的原核表达质粒,测序证明HIV-1 Nef基因全长为621 bp,编码206个氨基酸.在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白为包涵体的形式.HIV-1 Nef蛋白N端融合6×His标签便于纯化及鉴定.获得的高纯度HIT-1 Nef融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1∶10000).将转染Nef基因的内皮细胞,应用免疫组化的方法证明其抗体有高度的特异性.结论:构建了高表达HIT-1 Nef蛋白的原核表达系统,制备的Nef重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Nef基因的生物学活性提供了实验材料和依据.
目的:運用基因工程方法製備HIV-1 Nef重組蛋白及其抗體.方法:用PCR技術從HIV-1 H×B2質粒中擴增HIV-1 Nef基因,將測序鑒定過的HIT-1 Nef基因剋隆到原覈錶達載體pET28a(+)上,應用酶切鑒定、測序、SDS-PAGE及Western blot等方法鑒定基因片段的正確性及錶達蛋白的特異性.純化的重組蛋白免疫兔3次後,ELISA法測定兔多剋隆抗體滴度.用其製備的多剋隆抗體通過免疫組織化學方法測定錶達Nef基因的內皮細胞.結果:成功地構建瞭Nef基因的原覈錶達質粒,測序證明HIV-1 Nef基因全長為621 bp,編碼206箇氨基痠.在大腸桿菌BL21(DE3)中高效錶達的重組蛋白為包涵體的形式.HIV-1 Nef蛋白N耑融閤6×His標籤便于純化及鑒定.穫得的高純度HIT-1 Nef融閤蛋白,免疫動物後,可產生特異的高滴度抗體(ELISA滴度達1∶10000).將轉染Nef基因的內皮細胞,應用免疫組化的方法證明其抗體有高度的特異性.結論:構建瞭高錶達HIT-1 Nef蛋白的原覈錶達繫統,製備的Nef重組蛋白免疫動物,穫得瞭特異、高效價的抗體,為研究Nef基因的生物學活性提供瞭實驗材料和依據.
목적:운용기인공정방법제비HIV-1 Nef중조단백급기항체.방법:용PCR기술종HIV-1 H×B2질립중확증HIV-1 Nef기인,장측서감정과적HIT-1 Nef기인극륭도원핵표체재체pET28a(+)상,응용매절감정、측서、SDS-PAGE급Western blot등방법감정기인편단적정학성급표체단백적특이성.순화적중조단백면역토3차후,ELISA법측정토다극륭항체적도.용기제비적다극륭항체통과면역조직화학방법측정표체Nef기인적내피세포.결과:성공지구건료Nef기인적원핵표체질립,측서증명HIV-1 Nef기인전장위621 bp,편마206개안기산.재대장간균BL21(DE3)중고효표체적중조단백위포함체적형식.HIV-1 Nef단백N단융합6×His표첨편우순화급감정.획득적고순도HIT-1 Nef융합단백,면역동물후,가산생특이적고적도항체(ELISA적도체1∶10000).장전염Nef기인적내피세포,응용면역조화적방법증명기항체유고도적특이성.결론:구건료고표체HIT-1 Nef단백적원핵표체계통,제비적Nef중조단백면역동물,획득료특이、고효개적항체,위연구Nef기인적생물학활성제공료실험재료화의거.
