CAJ | 학술논문

目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2 (MAPK-activated protein kinase 2, MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况. 方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况.结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达.融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布.在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变.结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响.
목적:위료연구MAPK격활단백격매2 (MAPK-activated protein kinase 2, MK2)세포내정위여기공능적관계,구건료MK2불동돌변체적록색형광단백융합표체재체병관찰저사돌변체재세포내적정위정황. 방법:장극륭재록색형광단백재체pEGFP-C2상적야생형MK2(WT)통과정점돌변기술구건기무활성돌변체MK2(320A)화활성돌변체MK2(320E),전염NIH3T3세포,병재형광현미경하관찰기세포내정위정황.결과:각충MK2불동돌변체경측서감정정학후,재NIH3T3세포중득도고량표체.융합단백발출적록색형광표명,재정식상태하,MK2(WT)주요분포우세포핵내,MK2(320E)주요분포우세포질내,이MK2(320A)재세포핵화세포질중도유분포.재수도자외선(UV)자격후,MK2(WT)화MK2(320A)이위출핵,이MK2(320E)적세포내정위칙몰유발생명현적개변.결론:성공구건료록색형광단백표기적MK2불동돌변체병재진핵세포중진행료표체,관찰도불동돌변체대MK2세포내정위적영향.