温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2008年
1期
25-28
,共4页
滕红林%魏海峰%吴春雷%林利兴%陈雷%杨胜武
滕紅林%魏海峰%吳春雷%林利興%陳雷%楊勝武
등홍림%위해봉%오춘뢰%림리흥%진뢰%양성무
TIMP-4基因%克隆%基因表达%免疫活性
TIMP-4基因%剋隆%基因錶達%免疫活性
TIMP-4기인%극륭%기인표체%면역활성
目的:采用RT-PCR法获取TIMP-4基因,并通过原核表达获取具有生物活性的TIMP-4融合蛋白.方法:从SD大鼠心肌组织中提取总RNA,利用RT-PCR法扩增出TIMP-4基因,经基因序列分析后构建表达载体PET-28a(+)-TIMP-4,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TIMP-4的表达.利用N2+-NTA纯化和复性后,根据其骨肉瘤细胞迁移能力的影响检测其活性.结果:克隆到编码序列完全正确的大鼠TIMP-4基因,能在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物占全菌总蛋白的23.5%,N2+-NTA纯化和复性后,纯度达90%以上.纯化后的融合蛋白使骨肉瘤细胞株的迁移能力得到显著抑制.结论:通过基因克隆和原核表达的方式可以大量获得具有生物活性的TIMP-4融合蛋白.
目的:採用RT-PCR法穫取TIMP-4基因,併通過原覈錶達穫取具有生物活性的TIMP-4融閤蛋白.方法:從SD大鼠心肌組織中提取總RNA,利用RT-PCR法擴增齣TIMP-4基因,經基因序列分析後構建錶達載體PET-28a(+)-TIMP-4,轉化大腸桿菌BL21,IPTG誘導TIMP-4的錶達.利用N2+-NTA純化和複性後,根據其骨肉瘤細胞遷移能力的影響檢測其活性.結果:剋隆到編碼序列完全正確的大鼠TIMP-4基因,能在大腸桿菌中穫得高效錶達,錶達產物佔全菌總蛋白的23.5%,N2+-NTA純化和複性後,純度達90%以上.純化後的融閤蛋白使骨肉瘤細胞株的遷移能力得到顯著抑製.結論:通過基因剋隆和原覈錶達的方式可以大量穫得具有生物活性的TIMP-4融閤蛋白.
목적:채용RT-PCR법획취TIMP-4기인,병통과원핵표체획취구유생물활성적TIMP-4융합단백.방법:종SD대서심기조직중제취총RNA,이용RT-PCR법확증출TIMP-4기인,경기인서렬분석후구건표체재체PET-28a(+)-TIMP-4,전화대장간균BL21,IPTG유도TIMP-4적표체.이용N2+-NTA순화화복성후,근거기골육류세포천이능력적영향검측기활성.결과:극륭도편마서렬완전정학적대서TIMP-4기인,능재대장간균중획득고효표체,표체산물점전균총단백적23.5%,N2+-NTA순화화복성후,순도체90%이상.순화후적융합단백사골육류세포주적천이능력득도현저억제.결론:통과기인극륭화원핵표체적방식가이대량획득구유생물활성적TIMP-4융합단백.
