微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
6期
1070-1075
,共6页
王登峰%张淑琴%马学恩%简子建%周建华%郭巍%全滟平
王登峰%張淑琴%馬學恩%簡子建%週建華%郭巍%全滟平
왕등봉%장숙금%마학은%간자건%주건화%곽외%전염평
EIAV%受体%LTR%荧光素酶%细胞系
EIAV%受體%LTR%熒光素酶%細胞繫
EIAV%수체%LTR%형광소매%세포계
为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒(EIAV)的中和抗体和研究不同毒株与受体的亲和性,克隆了马慢病毒受体1(ELR1)cDNA并插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了表达载体pELR1.该载体瞬时转染293细胞后,经Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测,确认了ELR1的表达.在pELR1质粒的基础上,插入EIAV疫苗株前病毒基因组转录调控区LTR以及萤火虫荧光素酶报告基因(Luc)构建了表达载体pELR1-LTR-Luc,并转染293细胞,建立了ELR1-LTR-Luc(293-E)细胞系.该细胞系能稳定表达ELR1基因,并且能在LTR的调控下表达萤火虫荧光素酶基因.用1000TCID50的EIAV驴胎皮肤细胞疫苗株D18V13接种该细胞,24h后检测其荧光素酶活性是未接毒对照的3.15倍.同时用IFA检测证明了病毒在细胞内的增殖.EIAV强毒株L21的接毒试验显示,ELR1-LTR(293-E)细胞的萤火虫荧光素酶活性与该毒株的接毒量在10-2～10-7稀释范围内呈正相关.该细胞系传35代后,外源基因的表达特征未发生改变.该细胞系的建立为进一步开展EIAV与细胞受体相互作用以及中和抗体评价等研究奠定了重要基础.
為瞭在體外精確、簡便地測定馬傳染性貧血病毒(EIAV)的中和抗體和研究不同毒株與受體的親和性,剋隆瞭馬慢病毒受體1(ELR1)cDNA併插入真覈錶達載體pcDNA3.1(+),構建瞭錶達載體pELR1.該載體瞬時轉染293細胞後,經Western blot和間接免疫熒光(IFA)檢測,確認瞭ELR1的錶達.在pELR1質粒的基礎上,插入EIAV疫苗株前病毒基因組轉錄調控區LTR以及螢火蟲熒光素酶報告基因(Luc)構建瞭錶達載體pELR1-LTR-Luc,併轉染293細胞,建立瞭ELR1-LTR-Luc(293-E)細胞繫.該細胞繫能穩定錶達ELR1基因,併且能在LTR的調控下錶達螢火蟲熒光素酶基因.用1000TCID50的EIAV驢胎皮膚細胞疫苗株D18V13接種該細胞,24h後檢測其熒光素酶活性是未接毒對照的3.15倍.同時用IFA檢測證明瞭病毒在細胞內的增殖.EIAV彊毒株L21的接毒試驗顯示,ELR1-LTR(293-E)細胞的螢火蟲熒光素酶活性與該毒株的接毒量在10-2～10-7稀釋範圍內呈正相關.該細胞繫傳35代後,外源基因的錶達特徵未髮生改變.該細胞繫的建立為進一步開展EIAV與細胞受體相互作用以及中和抗體評價等研究奠定瞭重要基礎.
위료재체외정학、간편지측정마전염성빈혈병독(EIAV)적중화항체화연구불동독주여수체적친화성,극륭료마만병독수체1(ELR1)cDNA병삽입진핵표체재체pcDNA3.1(+),구건료표체재체pELR1.해재체순시전염293세포후,경Western blot화간접면역형광(IFA)검측,학인료ELR1적표체.재pELR1질립적기출상,삽입EIAV역묘주전병독기인조전록조공구LTR이급형화충형광소매보고기인(Luc)구건료표체재체pELR1-LTR-Luc,병전염293세포,건립료ELR1-LTR-Luc(293-E)세포계.해세포계능은정표체ELR1기인,병차능재LTR적조공하표체형화충형광소매기인.용1000TCID50적EIAV려태피부세포역묘주D18V13접충해세포,24h후검측기형광소매활성시미접독대조적3.15배.동시용IFA검측증명료병독재세포내적증식.EIAV강독주L21적접독시험현시,ELR1-LTR(293-E)세포적형화충형광소매활성여해독주적접독량재10-2～10-7희석범위내정정상관.해세포계전35대후,외원기인적표체특정미발생개변.해세포계적건립위진일보개전EIAV여세포수체상호작용이급중화항체평개등연구전정료중요기출.
