中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
37期
7417-7420
,共4页
王娟%张秋业%陈永兴%董增义
王娟%張鞦業%陳永興%董增義
왕연%장추업%진영흥%동증의
过敏性紫癜%树突状细胞%白细胞介素%干扰素γ%儿童
過敏性紫癜%樹突狀細胞%白細胞介素%榦擾素γ%兒童
과민성자전%수돌상세포%백세포개소%간우소γ%인동
目的:观察外周血单个核细胞来源的树突状细胞分泌白细胞介素水平在过敏性紫癜急性期的变化,分析其与Th亚群平衡的相关性.方法:实验于2006-10/2007-12在青岛大学医学院附属医院儿科研究所完成.①实验对象:取急性期过敏性紫癜患儿外周静脉血28份作为过敏性紫癜组,平均年龄7.53岁;以门诊体检的健康同龄儿童外周静脉血18份作为对照组.儿童家属均知情同意.②实验方法:采血2.0～3.0 mL/份,肝素抗凝,离心移取血浆1 mL冻存备测.采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,调整细胞悬液浓度为2×109 L-1,接种于24孔板向树突状细胞进行诱导培养.每孔加入含终浓度1 000 u/mL重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、500 u/mL重组人白细胞介素4的RPMI-1640完全培养液1 mL,隔日添加1/2首次浓度的上述两种细胞因子,半量换液.培养至第6天,每孔加入重组人肿瘤坏死因子α至终浓度200 u/mL.③实验评估:倒置显微镜观察树突状细胞的生长情况,以流式细胞仪检测成熟树突状细胞特异性表面分子CD83的表达率.采用ELISA法检测血浆干扰素γ、白细胞介素4的水平及培养上清中的白细胞介素10,12,18水平.结果:①树突状细胞体外诱导培养过程的形态学观察:外周血单个核细胞贴壁3 h后获得黏附细胞,加入细胞因子24 h后可见悬浮细胞增多,并呈细胞聚集现象,培养至第8天可见到大量具有毛刺状或根须状突起的悬浮细胞,即为树突状细胞.②树突状细胞的表型鉴定:过敏性紫癜组及对照组树突状细胞表面分子CD83均呈高表达,表达率分别为(69.29±1620)%,(69.26±18.77)%.③Th亚群变化:与对照组比较,过敏性紫癜组白细胞介素4水平明显升高(t'=5.09,P＜0.01),干扰素γ、干扰素γ/白细胞介素4水平均明显降低(t=4.26,P＜0.01;t'=7.98,P＜0.01).④树突状细胞分泌细胞因子的水平:与对照组比较,过敏性紫癜组树突状细胞白细胞介素12水平明显降低(t=2.53,P＜0.05),白细胞介素10,18水平均明显升高(t=2.07,P＜0.05:t=2.10,P＜0.05).⑤树突状细胞分泌细胞因子水平与Th亚群平衡相关性分析:两组树突状细胞分泌白细胞介素12水平均与干扰素γ水平呈显著正相关(r=0.56～0.62,P均＜0.01),与干扰素γ/白细胞介素4值呈正相关(r=0.51～0.52,P＜0.01或0.05).两组白细胞介素10,18水平均与白细胞介素4水平呈显著正相关(r=0.85～0.68,P均＜0.01),与干扰素γ/白细胞介素4值呈负相关(r=-0.75-0.49,P＜0.01或0.05).结论:过敏性紫癜患儿分泌白细胞介素12水平不足,而分泌白细胞介素10,18水平升高,提示过敏性紫癜患儿存在树突状细胞功能紊乱,且与Th1/Th2失衡关系密切.
目的:觀察外週血單箇覈細胞來源的樹突狀細胞分泌白細胞介素水平在過敏性紫癜急性期的變化,分析其與Th亞群平衡的相關性.方法:實驗于2006-10/2007-12在青島大學醫學院附屬醫院兒科研究所完成.①實驗對象:取急性期過敏性紫癜患兒外週靜脈血28份作為過敏性紫癜組,平均年齡7.53歲;以門診體檢的健康同齡兒童外週靜脈血18份作為對照組.兒童傢屬均知情同意.②實驗方法:採血2.0～3.0 mL/份,肝素抗凝,離心移取血漿1 mL凍存備測.採用密度梯度離心法穫取外週血單箇覈細胞,調整細胞懸液濃度為2×109 L-1,接種于24孔闆嚮樹突狀細胞進行誘導培養.每孔加入含終濃度1 000 u/mL重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、500 u/mL重組人白細胞介素4的RPMI-1640完全培養液1 mL,隔日添加1/2首次濃度的上述兩種細胞因子,半量換液.培養至第6天,每孔加入重組人腫瘤壞死因子α至終濃度200 u/mL.③實驗評估:倒置顯微鏡觀察樹突狀細胞的生長情況,以流式細胞儀檢測成熟樹突狀細胞特異性錶麵分子CD83的錶達率.採用ELISA法檢測血漿榦擾素γ、白細胞介素4的水平及培養上清中的白細胞介素10,12,18水平.結果:①樹突狀細胞體外誘導培養過程的形態學觀察:外週血單箇覈細胞貼壁3 h後穫得黏附細胞,加入細胞因子24 h後可見懸浮細胞增多,併呈細胞聚集現象,培養至第8天可見到大量具有毛刺狀或根鬚狀突起的懸浮細胞,即為樹突狀細胞.②樹突狀細胞的錶型鑒定:過敏性紫癜組及對照組樹突狀細胞錶麵分子CD83均呈高錶達,錶達率分彆為(69.29±1620)%,(69.26±18.77)%.③Th亞群變化:與對照組比較,過敏性紫癜組白細胞介素4水平明顯升高(t'=5.09,P＜0.01),榦擾素γ、榦擾素γ/白細胞介素4水平均明顯降低(t=4.26,P＜0.01;t'=7.98,P＜0.01).④樹突狀細胞分泌細胞因子的水平:與對照組比較,過敏性紫癜組樹突狀細胞白細胞介素12水平明顯降低(t=2.53,P＜0.05),白細胞介素10,18水平均明顯升高(t=2.07,P＜0.05:t=2.10,P＜0.05).⑤樹突狀細胞分泌細胞因子水平與Th亞群平衡相關性分析:兩組樹突狀細胞分泌白細胞介素12水平均與榦擾素γ水平呈顯著正相關(r=0.56～0.62,P均＜0.01),與榦擾素γ/白細胞介素4值呈正相關(r=0.51～0.52,P＜0.01或0.05).兩組白細胞介素10,18水平均與白細胞介素4水平呈顯著正相關(r=0.85～0.68,P均＜0.01),與榦擾素γ/白細胞介素4值呈負相關(r=-0.75-0.49,P＜0.01或0.05).結論:過敏性紫癜患兒分泌白細胞介素12水平不足,而分泌白細胞介素10,18水平升高,提示過敏性紫癜患兒存在樹突狀細胞功能紊亂,且與Th1/Th2失衡關繫密切.
목적:관찰외주혈단개핵세포래원적수돌상세포분비백세포개소수평재과민성자전급성기적변화,분석기여Th아군평형적상관성.방법:실험우2006-10/2007-12재청도대학의학원부속의원인과연구소완성.①실험대상:취급성기과민성자전환인외주정맥혈28빈작위과민성자전조,평균년령7.53세;이문진체검적건강동령인동외주정맥혈18빈작위대조조.인동가속균지정동의.②실험방법:채혈2.0～3.0 mL/빈,간소항응,리심이취혈장1 mL동존비측.채용밀도제도리심법획취외주혈단개핵세포,조정세포현액농도위2×109 L-1,접충우24공판향수돌상세포진행유도배양.매공가입함종농도1 000 u/mL중조인립세포-거서세포집락자격인자、500 u/mL중조인백세포개소4적RPMI-1640완전배양액1 mL,격일첨가1/2수차농도적상술량충세포인자,반량환액.배양지제6천,매공가입중조인종류배사인자α지종농도200 u/mL.③실험평고:도치현미경관찰수돌상세포적생장정황,이류식세포의검측성숙수돌상세포특이성표면분자CD83적표체솔.채용ELISA법검측혈장간우소γ、백세포개소4적수평급배양상청중적백세포개소10,12,18수평.결과:①수돌상세포체외유도배양과정적형태학관찰:외주혈단개핵세포첩벽3 h후획득점부세포,가입세포인자24 h후가견현부세포증다,병정세포취집현상,배양지제8천가견도대량구유모자상혹근수상돌기적현부세포,즉위수돌상세포.②수돌상세포적표형감정:과민성자전조급대조조수돌상세포표면분자CD83균정고표체,표체솔분별위(69.29±1620)%,(69.26±18.77)%.③Th아군변화:여대조조비교,과민성자전조백세포개소4수평명현승고(t'=5.09,P＜0.01),간우소γ、간우소γ/백세포개소4수평균명현강저(t=4.26,P＜0.01;t'=7.98,P＜0.01).④수돌상세포분비세포인자적수평:여대조조비교,과민성자전조수돌상세포백세포개소12수평명현강저(t=2.53,P＜0.05),백세포개소10,18수평균명현승고(t=2.07,P＜0.05:t=2.10,P＜0.05).⑤수돌상세포분비세포인자수평여Th아군평형상관성분석:량조수돌상세포분비백세포개소12수평균여간우소γ수평정현저정상관(r=0.56～0.62,P균＜0.01),여간우소γ/백세포개소4치정정상관(r=0.51～0.52,P＜0.01혹0.05).량조백세포개소10,18수평균여백세포개소4수평정현저정상관(r=0.85～0.68,P균＜0.01),여간우소γ/백세포개소4치정부상관(r=-0.75-0.49,P＜0.01혹0.05).결론:과민성자전환인분비백세포개소12수평불족,이분비백세포개소10,18수평승고,제시과민성자전환인존재수돌상세포공능문란,차여Th1/Th2실형관계밀절.
