CAJ | 학술논문

目的应用慢病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因转导大鼠9L胶质瘤细胞.方法构建慢病毒表达质粒pLenti6/V5-TK并以PCR、酶切及测序等方法鉴定.利用ViraPowerTM慢病毒表达系统,将重组质粒与包装混合物(Packaging Mix)共同转染293T细胞生产假病毒颗粒,转染48 h后收集培养上清,用其感染大鼠9L胶质瘤细胞,以抗稻瘟菌素(BSD)筛选出9L-TK细胞.RT-PCR、Western blot方法检测TK基因在9L-TK细胞中的表达.用MTT方法测试更昔洛韦(GCV)对体外培养的9L-TK细胞杀伤效果.结果构建的重组质粒pLenti6/V5-TK经PCR、酶切及测序鉴定正确;该质粒与包装质粒共转染293T细胞获取的慢病毒滴度达2.7×105转导单位(TU)/ml.经BDS筛选获得的9L-TK细胞RT-PCR及Western blot结果显示TK基因表达阳性,且GCV对该细胞作用敏感.结论成功利用慢病毒实现了TK基因转导大鼠9L胶质瘤细胞.
목적 응용만병독개도단순포진병독흉감격매(HSV-TK)기인전도대서9L효질류세포.방법 구건만병독표체질립pLenti6/V5-TK병이PCR、매절급측서등방법감정.이용ViraPowerTM만병독표체계통,장중조질립여포장혼합물(Packaging Mix)공동전염293T세포생산가병독과립,전염48 h후수집배양상청,용기감염대서9L효질류세포,이항도온균소(BSD)사선출9L-TK세포.RT-PCR、Western blot방법검측TK기인재9L-TK세포중적표체.용MTT방법측시경석락위(GCV)대체외배양적9L-TK세포살상효과.결과 구건적중조질립pLenti6/V5-TK경PCR、매절급측서감정정학;해질립여포장질립공전염293T세포획취적만병독적도체2.7×105전도단위(TU)/ml.경BDS사선획득적9L-TK세포RT-PCR급Western blot결과현시TK기인표체양성,차GCV대해세포작용민감.결론 성공이용만병독실현료TK기인전도대서9L효질류세포.