利用Pyrobest DNA聚合酶一步法进行大片段基因的定点突变
이용Pyrobest DNA취합매일보법진행대편단기인적정점돌변
One-Step and Cost-Effective Site-Directed Mutagenesis of Large Plasmids Using Pyrobest DNA Polymerase
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
    2007年 4期 590-593 ,共4页

    朱大兴%周清华%王艳萍%车国卫%唐小军%朱文%陈小禾%孙芝琳

    주대흥%주청화%왕염평%차국위%당소군%주문%진소화%손지림

    Pyrobest DNA聚合酶%定点突变%PCR Pyrobest DNA聚閤酶%定點突變%PCR
    Pyrobest DNA취합매%정점돌변%PCR
    目的:介绍一种简单、快速、高效和经济的进行大片段基因定点突变的方法.方法:小量抽提含有NM23H1-EGFP融合基因的逆转录病毒真核表达质粒pLXSN-NM23H1-EGFP,体外合成突变引物对,利用高保真Pyrobest DNA聚合酶对质粒DNA进行PCR突变反应,然后用Dpn Ⅰ限制性内切酶消化PCR产物以去除模板DNA,取适量消化产物转化大肠杆菌XL1-Blue,随机挑选克隆进行测序筛选、鉴定所需突变株.结果:在NM23H1-EGFP基因中引入了S44A、P96S、H118F、S120G、P96S-S120G等5个替换突变位点及9 bp处的插入突变.结论:该方法简单、快速、高效、经济,不须纯化中间产物,不须亚克隆,突变效率几乎为100%,是一种值得推广应用的方法.
    목적:개소일충간단、쾌속、고효화경제적진행대편단기인정점돌변적방법.방법:소량추제함유NM23H1-EGFP융합기인적역전록병독진핵표체질립pLXSN-NM23H1-EGFP,체외합성돌변인물대,이용고보진Pyrobest DNA취합매대질립DNA진행PCR돌변반응,연후용Dpn Ⅰ한제성내절매소화PCR산물이거제모판DNA,취괄량소화산물전화대장간균XL1-Blue,수궤도선극륭진행측서사선、감정소수돌변주.결과:재NM23H1-EGFP기인중인입료S44A、P96S、H118F、S120G、P96S-S120G등5개체환돌변위점급9 bp처적삽입돌변.결론:해방법간단、쾌속、고효、경제,불수순화중간산물,불수아극륭,돌변효솔궤호위100%,시일충치득추엄응용적방법.
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