郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2007年
5期
887-890
,共4页
马一君%李雪莲%胡军%付庆%杜献堂
馬一君%李雪蓮%鬍軍%付慶%杜獻堂
마일군%리설련%호군%부경%두헌당
A型流感病毒%核蛋白%克隆%表达
A型流感病毒%覈蛋白%剋隆%錶達
A형류감병독%핵단백%극륭%표체
目的:构建A型流感病毒核蛋白(NP)的原核表达质粒,分析其在大肠杆菌中的表达状况.方法:采用逆转录聚合酶链式反应技术从A型流感病毒基因组中扩增出编码核蛋白的基因片段,克隆至pGEM-T Easy载体,PCR筛选阳性克隆并测序.经酶切后将目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL2(CDE3),PCR和酶切鉴定转化菌落.将阳性菌落经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹分析目的蛋白的表达.结果:RT-PCR扩增出NP基因序列,将其亚克隆至表达载体pGEX-4T-1构建成重组表达质粒,并在BL2(CDE3)中表达了NP融合蛋白.结论:成功构建A型流感病毒NP的重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达了NP融合蛋白.
目的:構建A型流感病毒覈蛋白(NP)的原覈錶達質粒,分析其在大腸桿菌中的錶達狀況.方法:採用逆轉錄聚閤酶鏈式反應技術從A型流感病毒基因組中擴增齣編碼覈蛋白的基因片段,剋隆至pGEM-T Easy載體,PCR篩選暘性剋隆併測序.經酶切後將目的片段亞剋隆至錶達載體pGEX-4T-1,轉化大腸桿菌BL2(CDE3),PCR和酶切鑒定轉化菌落.將暘性菌落經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和免疫印跡分析目的蛋白的錶達.結果:RT-PCR擴增齣NP基因序列,將其亞剋隆至錶達載體pGEX-4T-1構建成重組錶達質粒,併在BL2(CDE3)中錶達瞭NP融閤蛋白.結論:成功構建A型流感病毒NP的重組錶達質粒,併在大腸桿菌中錶達瞭NP融閤蛋白.
목적:구건A형류감병독핵단백(NP)적원핵표체질립,분석기재대장간균중적표체상황.방법:채용역전록취합매련식반응기술종A형류감병독기인조중확증출편마핵단백적기인편단,극륭지pGEM-T Easy재체,PCR사선양성극륭병측서.경매절후장목적편단아극륭지표체재체pGEX-4T-1,전화대장간균BL2(CDE3),PCR화매절감정전화균락.장양성균락경이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도,십이완기류산납-취병희선알응효전영화면역인적분석목적단백적표체.결과:RT-PCR확증출NP기인서렬,장기아극륭지표체재체pGEX-4T-1구건성중조표체질립,병재BL2(CDE3)중표체료NP융합단백.결론:성공구건A형류감병독NP적중조표체질립,병재대장간균중표체료NP융합단백.
