华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2007年
4期
168-171
,共4页
周雪媚%霍惠玲%佘锐萍%李永清%冯国民%章振华%王宏俊
週雪媚%霍惠玲%佘銳萍%李永清%馮國民%章振華%王宏俊
주설미%곽혜령%사예평%리영청%풍국민%장진화%왕굉준
禽流感病毒%HA基因%重组马立克氏病病毒
禽流感病毒%HA基因%重組馬立剋氏病病毒
금류감병독%HA기인%중조마립극씨병병독
本试验首先用RT-PCR方法扩增出H9N2亚型禽流感病的HA基因,大小约1 700 bp,将其克隆到真核表达载体pcDNA中,并将该真核表达载体上的CMV启动子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆人马立克氏病病毒US2基因中,成功的构建了马立克氏病病毒的转移载体.然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,通过蓝斑筛选获得重组病毒.该重组病毒通过PCR方法鉴定证实其基因组中含有完整的HA基因.免疫酶反应和Western-blot证实重组病毒表达了禽流感HA蛋白,表达的HA蛋白具有血凝活性.
本試驗首先用RT-PCR方法擴增齣H9N2亞型禽流感病的HA基因,大小約1 700 bp,將其剋隆到真覈錶達載體pcDNA中,併將該真覈錶達載體上的CMV啟動子控製的含LacZ和HA基因錶達盒剋隆人馬立剋氏病病毒US2基因中,成功的構建瞭馬立剋氏病病毒的轉移載體.然後,通過脂質體方法轉染已感染馬立剋氏病病毒的鷄胚成纖維細胞(CEF)中,通過藍斑篩選穫得重組病毒.該重組病毒通過PCR方法鑒定證實其基因組中含有完整的HA基因.免疫酶反應和Western-blot證實重組病毒錶達瞭禽流感HA蛋白,錶達的HA蛋白具有血凝活性.
본시험수선용RT-PCR방법확증출H9N2아형금류감병적HA기인,대소약1 700 bp,장기극륭도진핵표체재체pcDNA중,병장해진핵표체재체상적CMV계동자공제적함LacZ화HA기인표체합극륭인마립극씨병병독US2기인중,성공적구건료마립극씨병병독적전이재체.연후,통과지질체방법전염이감염마립극씨병병독적계배성섬유세포(CEF)중,통과람반사선획득중조병독.해중조병독통과PCR방법감정증실기기인조중함유완정적HA기인.면역매반응화Western-blot증실중조병독표체료금류감HA단백,표체적HA단백구유혈응활성.
