CAJ | 학술논문

转录因子Snail是调控肿瘤细胞迁徙转移的重要调控分子,基于干细胞与肿瘤细胞分子机制的重叠性,提出通过借鉴肿瘤细胞迁移的相关机制以用于提高骨髓基质干细胞向缺氧受损组织迁移能力的假设和研究思路,探讨Snail基因在人骨髓基质干细胞(MSCs)中的转染和表达情况,及转染后对基质干细胞促迁移作用、骨架结构的稳定作用及对无血清培养诱导细胞凋亡的保护作用.密度梯度离心法及细胞体外培养分离纯化人骨髓MSCs,脂质体法将重组表达载体pCAGGSneo-Snail-HA转染MSCs,G418筛选稳定表达,流式细胞仪检测MSCs表面抗原,采用免疫荧光染色技术检测转染后MSCs报告基因HA及目的基因Snail表达,Transwell细胞迁移实验和Western-blot评估细胞迁移能力和检测有关细胞信号转导通路分子水平变化.荧光染色分析细胞骨架,Sub-G1凋亡峰流式细胞仪检测细胞凋亡率并评估细胞抗凋亡能力.经流式细胞仪选择检测分离纯化扩增MSCs表面分子特点为CD34(-)/CD29(+),Snail及报告基因在转染后MSCs呈阳性表达,Snail质粒转染MSCs(MSCs-Sna)较对照空质粒转染MSCs(MSCs-neo)细胞迁移率增加(P《0.05),PI-3K信号通路特异性抑制剂Wortmannin能显著抑制此迁移率的增加,无血清培养72h后,MSCs-Sna凋亡率较MSCs-neo低(P《0.05).经Snail基因转染,MSCs迁移能力、骨架结构的稳定性及在无血清培养环境中抗凋亡能力增加.
전록인자Snail시조공종류세포천사전이적중요조공분자,기우간세포여종류세포분자궤제적중첩성,제출통과차감종류세포천이적상관궤제이용우제고골수기질간세포향결양수손조직천이능력적가설화연구사로,탐토Snail기인재인골수기질간세포(MSCs)중적전염화표체정황,급전염후대기질간세포촉천이작용、골가결구적은정작용급대무혈청배양유도세포조망적보호작용.밀도제도리심법급세포체외배양분리순화인골수MSCs,지질체법장중조표체재체pCAGGSneo-Snail-HA전염MSCs,G418사선은정표체,류식세포의검측MSCs표면항원,채용면역형광염색기술검측전염후MSCs보고기인HA급목적기인Snail표체,Transwell세포천이실험화Western-blot평고세포천이능력화검측유관세포신호전도통로분자수평변화.형광염색분석세포골가,Sub-G1조망봉류식세포의검측세포조망솔병평고세포항조망능력.경류식세포의선택검측분리순화확증MSCs표면분자특점위CD34(-)/CD29(+),Snail급보고기인재전염후MSCs정양성표체,Snail질립전염MSCs(MSCs-Sna)교대조공질립전염MSCs(MSCs-neo)세포천이솔증가(P《0.05),PI-3K신호통로특이성억제제Wortmannin능현저억제차천이솔적증가,무혈청배양72h후,MSCs-Sna조망솔교MSCs-neo저(P《0.05).경Snail기인전염,MSCs천이능력、골가결구적은정성급재무혈청배양배경중항조망능력증가.