青霉素结合蛋白2a C-末端在大肠杆菌M15中的表达、纯化及鉴定
청매소결합단백2a C-말단재대장간균M15중적표체、순화급감정
Expression and purification of a soluble PBP2a from MRSA in Escherichia coli M15
  • 万方数据
    创伤外科杂志 창상외과잡지
    JOURNAL OF AUMATIC SURGERY
    2007年 1期 28-31 ,共4页

    和生琦%丁国富%李斌%李军%罗平%董燕%张蓉%颜伟%周红

    화생기%정국부%리빈%리군%라평%동연%장용%안위%주홍

    金黄色葡萄球菌%青霉素结合蛋白2a%大肠杆菌%mecA基因 金黃色葡萄毬菌%青黴素結閤蛋白2a%大腸桿菌%mecA基因
    금황색포도구균%청매소결합단백2a%대장간균%mecA기인
    目的 构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达.方法 采用PCR方法扩增mecA C末端DNA,将其与表达载体pQE30连接;再通过PCR及双酶切鉴定连接产物.将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后,用1mmol/L的IPTG进行诱导表达.应用Ni-NTA琼脂糖进行亲和层析纯化目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行鉴定.结果 成功构建pQE30-mecA重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化获得分子量为39.7 kDa的蛋白;Westem blotting和肽指纹图谱证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白.结论 在大肠杆菌内成功表达具有活性的PBP2a,为后期研究和开发抗MRSA药物奠定了基础.
    목적 구건함목적기인mecA C말단적중조자병재대장간균M15중진행단백표체.방법 채용PCR방법확증mecA C말단DNA,장기여표체재체pQE30련접;재통과PCR급쌍매절감정련접산물.장함목적기인편단적양성중조질립전화대장간균M15후,용1mmol/L적IPTG진행유도표체.응용Ni-NTA경지당진행친화층석순화목적단백,병용SDS-PAGE화Western blotting대표체산물진행감정.결과 성공구건pQE30-mecA중조표체질립,전화대장간균M15,경IPTG유도표체,친화층석순화획득분자량위39.7 kDa적단백;Westem blotting화태지문도보증실해단백위대유다취조안산표첨적융합단백.결론 재대장간균내성공표체구유활성적PBP2a,위후기연구화개발항MRSA약물전정료기출.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문