生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
6期
996-1001
,共6页
余榕捷%高媛%戴云%谭毅力%曾志宏%周天鸿%洪岸
餘榕捷%高媛%戴雲%譚毅力%曾誌宏%週天鴻%洪岸
여용첩%고원%대운%담의력%증지굉%주천홍%홍안
VPAC2%中国仓鼠卵巢细胞%表达
VPAC2%中國倉鼠卵巢細胞%錶達
VPAC2%중국창서란소세포%표체
PAC2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide ,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,介导多种重要生物学功能.为获得稳定特异表达VPAC2的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,将pcDNA-VPAC2表达载体转染CHO细胞,G418筛选转染阳性克隆,PACAP38标准品诱导阳性克隆细胞的胞内cAMP生成,筛选出对PACAP38最为敏感的阳性单克隆细胞株(VPAC2-CHO),运用RT-PCR、Western blot和免疫荧光法检测VPAC2受体表达情况,利用VPAC2受体特异激动剂通过竞争性结合试验和促进胞内第二信使cAMP生成的活性检测实验证实, VPAC2-CHO特异表达有功能的VPAC2.Scatchard作图分析显示VPAC2-CHO的VPAC2受体密度为(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白,PACAP38与VPAC2的解离常数Kd值为(0.55±0.10)nmol/L.特异表达VPAC2受体细胞系的构建为深入研究该受体理化性质、生物学功能以及筛选、开发VPAC2受体新型特异激动剂和拮抗剂等研究奠定了基础.
PAC2是垂體腺苷痠環化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide ,PACAP)和血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受體,介導多種重要生物學功能.為穫得穩定特異錶達VPAC2的中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)細胞,將pcDNA-VPAC2錶達載體轉染CHO細胞,G418篩選轉染暘性剋隆,PACAP38標準品誘導暘性剋隆細胞的胞內cAMP生成,篩選齣對PACAP38最為敏感的暘性單剋隆細胞株(VPAC2-CHO),運用RT-PCR、Western blot和免疫熒光法檢測VPAC2受體錶達情況,利用VPAC2受體特異激動劑通過競爭性結閤試驗和促進胞內第二信使cAMP生成的活性檢測實驗證實, VPAC2-CHO特異錶達有功能的VPAC2.Scatchard作圖分析顯示VPAC2-CHO的VPAC2受體密度為(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白,PACAP38與VPAC2的解離常數Kd值為(0.55±0.10)nmol/L.特異錶達VPAC2受體細胞繫的構建為深入研究該受體理化性質、生物學功能以及篩選、開髮VPAC2受體新型特異激動劑和拮抗劑等研究奠定瞭基礎.
PAC2시수체선감산배화매격활다태(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide ,PACAP)화혈관활성장태(vasoactive intestinal peptide,VIP)적공동수체,개도다충중요생물학공능.위획득은정특이표체VPAC2적중국창서란소(Chinese hamster ovary, CHO)세포,장pcDNA-VPAC2표체재체전염CHO세포,G418사선전염양성극륭,PACAP38표준품유도양성극륭세포적포내cAMP생성,사선출대PACAP38최위민감적양성단극륭세포주(VPAC2-CHO),운용RT-PCR、Western blot화면역형광법검측VPAC2수체표체정황,이용VPAC2수체특이격동제통과경쟁성결합시험화촉진포내제이신사cAMP생성적활성검측실험증실, VPAC2-CHO특이표체유공능적VPAC2.Scatchard작도분석현시VPAC2-CHO적VPAC2수체밀도위(1.1±0.2)pmol/mg막단백,PACAP38여VPAC2적해리상수Kd치위(0.55±0.10)nmol/L.특이표체VPAC2수체세포계적구건위심입연구해수체이화성질、생물학공능이급사선、개발VPAC2수체신형특이격동제화길항제등연구전정료기출.
