卫生研究
衛生研究
위생연구
JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH
2006年
2期
152-154
,共3页
赵明才%鲍朗%吴悦涵%张会东
趙明纔%鮑朗%吳悅涵%張會東
조명재%포랑%오열함%장회동
结核分枝杆菌%Rv2994基因%喹诺酮%药物耐受性
結覈分枝桿菌%Rv2994基因%喹諾酮%藥物耐受性
결핵분지간균%Rv2994기인%규낙동%약물내수성
目的构建结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达载体并进行表达,为进一步研究奠定基础.方法PCR扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT获得重组表达质粒pGEX-2994,转化大肠杆菌测序后诱导表达,纯化目的蛋白并免疫新西兰大白兔获取多价抗体.结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Rv2994基因,成功构建了融合表达质粒pGEX-Rv2994,转化大肠杆菌JM109后,经IPTG诱导,表达出约73kDa重组融合蛋白,用Western blotting证实其有良好的抗原性,纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的抗体.结论成功构建了原核表达载体pGEX-2994,获得并纯化了GST-Rv2994融合蛋白,制备了高效价的多价血清,为Rv2994基因的功能研究奠定了基础.
目的構建結覈分枝桿菌Rv2994基因原覈錶達載體併進行錶達,為進一步研究奠定基礎.方法PCR擴增Rv2994基因編碼序列,定嚮剋隆入融閤蛋白原覈錶達載體pGEX-1λT穫得重組錶達質粒pGEX-2994,轉化大腸桿菌測序後誘導錶達,純化目的蛋白併免疫新西蘭大白兔穫取多價抗體.結果從結覈分枝桿菌H37Rv株基因組DNA中擴增齣Rv2994基因,成功構建瞭融閤錶達質粒pGEX-Rv2994,轉化大腸桿菌JM109後,經IPTG誘導,錶達齣約73kDa重組融閤蛋白,用Western blotting證實其有良好的抗原性,純化蛋白免疫新西蘭大白兔,穫得瞭高效價的抗體.結論成功構建瞭原覈錶達載體pGEX-2994,穫得併純化瞭GST-Rv2994融閤蛋白,製備瞭高效價的多價血清,為Rv2994基因的功能研究奠定瞭基礎.
목적구건결핵분지간균Rv2994기인원핵표체재체병진행표체,위진일보연구전정기출.방법PCR확증Rv2994기인편마서렬,정향극륭입융합단백원핵표체재체pGEX-1λT획득중조표체질립pGEX-2994,전화대장간균측서후유도표체,순화목적단백병면역신서란대백토획취다개항체.결과종결핵분지간균H37Rv주기인조DNA중확증출Rv2994기인,성공구건료융합표체질립pGEX-Rv2994,전화대장간균JM109후,경IPTG유도,표체출약73kDa중조융합단백,용Western blotting증실기유량호적항원성,순화단백면역신서란대백토,획득료고효개적항체.결론성공구건료원핵표체재체pGEX-2994,획득병순화료GST-Rv2994융합단백,제비료고효개적다개혈청,위Rv2994기인적공능연구전정료기출.
