生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2005年
5期
485-487
,共3页
王平%黄庆生%丁天兵%任君萍%宋建华%徐志凯
王平%黃慶生%丁天兵%任君萍%宋建華%徐誌凱
왕평%황경생%정천병%임군평%송건화%서지개
SARS冠状病毒%囊膜蛋白%原核表达%单克隆抗体
SARS冠狀病毒%囊膜蛋白%原覈錶達%單剋隆抗體
SARS관상병독%낭막단백%원핵표체%단극륭항체
从基因库中调取SARS冠状病毒囊膜E蛋白基因序列,用连接PCR方法合成完整片段.测序确认后与人免疫球蛋白(IgG)序列Fc段连接并克隆至原核表达载体pPRO EX Hta中.从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb).连接PCR扩增出231 bp的DNA,测序结果与GenBank公布的序列一致,与人IgG序列Fc段基因连接后克隆至原核表达载体,在大肠杆菌中获得较好表达.表达产物经SDS-PAGE后,在相对分子质量(Mr)约37 000处可见1条明显的诱导表达条带.Western印迹的结果表明,该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异性免疫反应.从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠,制备出2株抗E蛋白的mAb.这些mAb与SDS-PAGE凝胶上Mr约为37 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应.所获得的重组表达E蛋白及特异性mAb为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础.
從基因庫中調取SARS冠狀病毒囊膜E蛋白基因序列,用連接PCR方法閤成完整片段.測序確認後與人免疫毬蛋白(IgG)序列Fc段連接併剋隆至原覈錶達載體pPRO EX Hta中.從SDS-PAGE凝膠中迴收錶達產物後免疫BALB/c小鼠,經融閤、篩選製備特異性單剋隆抗體(mAb).連接PCR擴增齣231 bp的DNA,測序結果與GenBank公佈的序列一緻,與人IgG序列Fc段基因連接後剋隆至原覈錶達載體,在大腸桿菌中穫得較好錶達.錶達產物經SDS-PAGE後,在相對分子質量(Mr)約37 000處可見1條明顯的誘導錶達條帶.Western印跡的結果錶明,該電泳帶與SARS患者的恢複期血清呈特異性免疫反應.從SDS-PAGE凝膠中迴收錶達產物併免疫BALB/c小鼠,製備齣2株抗E蛋白的mAb.這些mAb與SDS-PAGE凝膠上Mr約為37 000的蛋白帶也呈現很彊的免疫反應.所穫得的重組錶達E蛋白及特異性mAb為進一步建立SARS病毒感染早期診斷的方法奠定瞭基礎.
종기인고중조취SARS관상병독낭막E단백기인서렬,용련접PCR방법합성완정편단.측서학인후여인면역구단백(IgG)서렬Fc단련접병극륭지원핵표체재체pPRO EX Hta중.종SDS-PAGE응효중회수표체산물후면역BALB/c소서,경융합、사선제비특이성단극륭항체(mAb).련접PCR확증출231 bp적DNA,측서결과여GenBank공포적서렬일치,여인IgG서렬Fc단기인련접후극륭지원핵표체재체,재대장간균중획득교호표체.표체산물경SDS-PAGE후,재상대분자질량(Mr)약37 000처가견1조명현적유도표체조대.Western인적적결과표명,해전영대여SARS환자적회복기혈청정특이성면역반응.종SDS-PAGE응효중회수표체산물병면역BALB/c소서,제비출2주항E단백적mAb.저사mAb여SDS-PAGE응효상Mr약위37 000적단백대야정현흔강적면역반응.소획득적중조표체E단백급특이성mAb위진일보건립SARS병독감염조기진단적방법전정료기출.
