武汉大学学报(理学版)
武漢大學學報(理學版)
무한대학학보(이학판)
JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY(Natural Science Edition)
2004年
2期
206-210
,共5页
桂亦瑞%董长垣%陈晓%张蔚英%刘军
桂亦瑞%董長垣%陳曉%張蔚英%劉軍
계역서%동장원%진효%장위영%류군
蓝舌病毒%S7基因%克隆%基因型
藍舌病毒%S7基因%剋隆%基因型
람설병독%S7기인%극륭%기인형
根据已发表的蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)10型标准株S7基因设计合成一对与其5′-NCR (noncoding region)序列同源的引物, 经反转录-聚合酶链反应 (RT-PCR) 扩增出 HbC3株和10型标准株长度分别为277 bp和290 bp的S7基因5′非编码区cDNA片段, 以建立起dsRNA体外扩增系统.将扩增的BTV-HbC3毒株的S7基因5′非编码区片段通过粘端连接克隆到pUCm-T载体中, 用PCR技术和限制性内切酶分析鉴定, 表明获得重组质粒pUCm-T-BTV-HbC3-S7.通过核苷酸序列分析方法分别将2个毒株的S7基因5′非编码区与呼肠孤病毒-3 (reovirus-3) 型比对, 发现BTV-HbC3株与呼肠孤病毒-3 L2基因5′非编码区基因具有完全的同源性.将BTV-HbC3毒株接种在不同细胞系如猴肾传代细胞(Vero)、人肝癌细胞(Hep-3B)和小鼠成纤维细胞(L929)等细胞株上,比较BTV-HbC3在不同种系细胞上的增殖特征,并且用双向免疫扩散试验证实BTV-HbC3和BTV-10型之间的血清学关系.结合本实验室的研究结果提示BTV-HbC3株可能是蓝舌病毒的一个新的基因型.
根據已髮錶的藍舌病毒(bluetongue virus,BTV)10型標準株S7基因設計閤成一對與其5′-NCR (noncoding region)序列同源的引物, 經反轉錄-聚閤酶鏈反應 (RT-PCR) 擴增齣 HbC3株和10型標準株長度分彆為277 bp和290 bp的S7基因5′非編碼區cDNA片段, 以建立起dsRNA體外擴增繫統.將擴增的BTV-HbC3毒株的S7基因5′非編碼區片段通過粘耑連接剋隆到pUCm-T載體中, 用PCR技術和限製性內切酶分析鑒定, 錶明穫得重組質粒pUCm-T-BTV-HbC3-S7.通過覈苷痠序列分析方法分彆將2箇毒株的S7基因5′非編碼區與呼腸孤病毒-3 (reovirus-3) 型比對, 髮現BTV-HbC3株與呼腸孤病毒-3 L2基因5′非編碼區基因具有完全的同源性.將BTV-HbC3毒株接種在不同細胞繫如猴腎傳代細胞(Vero)、人肝癌細胞(Hep-3B)和小鼠成纖維細胞(L929)等細胞株上,比較BTV-HbC3在不同種繫細胞上的增殖特徵,併且用雙嚮免疫擴散試驗證實BTV-HbC3和BTV-10型之間的血清學關繫.結閤本實驗室的研究結果提示BTV-HbC3株可能是藍舌病毒的一箇新的基因型.
근거이발표적람설병독(bluetongue virus,BTV)10형표준주S7기인설계합성일대여기5′-NCR (noncoding region)서렬동원적인물, 경반전록-취합매련반응 (RT-PCR) 확증출 HbC3주화10형표준주장도분별위277 bp화290 bp적S7기인5′비편마구cDNA편단, 이건립기dsRNA체외확증계통.장확증적BTV-HbC3독주적S7기인5′비편마구편단통과점단련접극륭도pUCm-T재체중, 용PCR기술화한제성내절매분석감정, 표명획득중조질립pUCm-T-BTV-HbC3-S7.통과핵감산서렬분석방법분별장2개독주적S7기인5′비편마구여호장고병독-3 (reovirus-3) 형비대, 발현BTV-HbC3주여호장고병독-3 L2기인5′비편마구기인구유완전적동원성.장BTV-HbC3독주접충재불동세포계여후신전대세포(Vero)、인간암세포(Hep-3B)화소서성섬유세포(L929)등세포주상,비교BTV-HbC3재불동충계세포상적증식특정,병차용쌍향면역확산시험증실BTV-HbC3화BTV-10형지간적혈청학관계.결합본실험실적연구결과제시BTV-HbC3주가능시람설병독적일개신적기인형.
