CAJ | 학술논문

已报道的EMSA和Footprinting试验表明黑曲霉Aspergillus niger T21糖化酶基因glaA启动子区-489～-414 bp及-390～-345 bp (分别简称为DC, PC)是与蛋白粗提液中同一蛋白因子结合, 并均含有CCAAT五核苷酸的序列. 对DC, PC在糖化酶表达调控中的作用进行了分析. 用CGTAA取代CCAAT, 获得突变体DCm, PCm, 两者均丧失体外结合蛋白因子的能力. 突变体的体内分析结果显示, DC和PC中任何一个发生突变或改变DC, PC在原启动子中的相对方向, 则启动子的活性下降到基础表达水平. 将多拷贝串联后的DC引入A. niger T21glaA启动子原位, 则内源糖化酶的表达和由该启动子引导的外源uidA基因的表达均发生下降, 但由构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA引导的uidA的表达不受影响, 而且EMSA结果表明不等DC拷贝的A. niger转化子中DNA结合蛋白的含量没有明显变化, 表明多拷贝DC的引入引起了调控蛋白的滴定效应. 从A. niger T21cDNA中克隆到AngHapC基因, 将AngHapC基因引入上述含多拷贝DC而糖化酶低表达的A. niger菌株, AngHapC基因的表达使糖化酶的表达量得到明显回升. 上述结果表明, DC和PC中CCAAT五核苷酸序列为蛋白因子结合所必需, 而且两者必须同时与调控蛋白结合才能发挥促进转录的作用, AngHapC为与DC区域结合的正调节蛋白.
이보도적EMSA화Footprinting시험표명흑곡매Aspergillus niger T21당화매기인glaA계동자구-489～-414 bp급-390～-345 bp (분별간칭위DC, PC)시여단백조제액중동일단백인자결합, 병균함유CCAAT오핵감산적서렬. 대DC, PC재당화매표체조공중적작용진행료분석. 용CGTAA취대CCAAT, 획득돌변체DCm, PCm, 량자균상실체외결합단백인자적능력. 돌변체적체내분석결과현시, DC화PC중임하일개발생돌변혹개변DC, PC재원계동자중적상대방향, 칙계동자적활성하강도기출표체수평. 장다고패천련후적DC인입A. niger T21glaA계동자원위, 칙내원당화매적표체화유해계동자인도적외원uidA기인적표체균발생하강, 단유구소곡매3-린산감유철탈경매계동자PgpdA인도적uidA적표체불수영향, 이차EMSA결과표명불등DC고패적A. niger전화자중DNA결합단백적함량몰유명현변화, 표명다고패DC적인입인기료조공단백적적정효응. 종A. niger T21cDNA중극륭도AngHapC기인, 장AngHapC기인인입상술함다고패DC이당화매저표체적A. niger균주, AngHapC기인적표체사당화매적표체량득도명현회승. 상술결과표명, DC화PC중CCAAT오핵감산서렬위단백인자결합소필수, 이차량자필수동시여조공단백결합재능발휘촉진전록적작용, AngHapC위여DC구역결합적정조절단백.