生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2001年
5期
520-525
,共6页
欧阳菁%杨林%龙綮新%王珣章%邢珂%魏平华
歐暘菁%楊林%龍綮新%王珣章%邢珂%魏平華
구양정%양림%룡계신%왕순장%형가%위평화
猪生长激素%巴斯德毕赤酵母表达载体系统%基因表达%N-糖基化分析
豬生長激素%巴斯德畢赤酵母錶達載體繫統%基因錶達%N-糖基化分析
저생장격소%파사덕필적효모표체재체계통%기인표체%N-당기화분석
利用含有强启动子PAox1和α-MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA-pST.通过电击将经Sac Ⅰ酶切后线性化的pPICZαA-pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并筛选Mut+表型的重组菌.表达产物的SDS-PAGE和Westem blot结果表明,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同.将经Sac Ⅰ酶切后线性化的pPICZαA-pST再次转化重组酵母细胞X-33/pPICZαA-pST(Mut+),所得表达产物的SDS-PAGE和Western blot结果显示,PST基因的表达水平明显提高,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原-抗体结合反应,表达量达956mg/L.将发酵液上清进行N-糖基化分析,显示rPST无N-糖基化加工修饰.
利用含有彊啟動子PAox1和α-MF信號肽序列的巴斯德畢赤酵母載體質粒pPICZαA構建齣含PST基因的重組質粒pPICZαA-pST.通過電擊將經Sac Ⅰ酶切後線性化的pPICZαA-pST質粒轉化到巴斯德畢赤酵母X-33菌中,併篩選Mut+錶型的重組菌.錶達產物的SDS-PAGE和Westem blot結果錶明,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大,而胞內的PST蛋白分子量與天然PST大小相同.將經Sac Ⅰ酶切後線性化的pPICZαA-pST再次轉化重組酵母細胞X-33/pPICZαA-pST(Mut+),所得錶達產物的SDS-PAGE和Western blot結果顯示,PST基因的錶達水平明顯提高,且錶達產生的蛋白均可髮生正確的抗原-抗體結閤反應,錶達量達956mg/L.將髮酵液上清進行N-糖基化分析,顯示rPST無N-糖基化加工脩飾.
이용함유강계동자PAox1화α-MF신호태서렬적파사덕필적효모재체질립pPICZαA구건출함PST기인적중조질립pPICZαA-pST.통과전격장경Sac Ⅰ매절후선성화적pPICZαA-pST질립전화도파사덕필적효모X-33균중,병사선Mut+표형적중조균.표체산물적SDS-PAGE화Westem blot결과표명,분비우포외적PST단백분자량비천연PST분자량초대,이포내적PST단백분자량여천연PST대소상동.장경Sac Ⅰ매절후선성화적pPICZαA-pST재차전화중조효모세포X-33/pPICZαA-pST(Mut+),소득표체산물적SDS-PAGE화Western blot결과현시,PST기인적표체수평명현제고,차표체산생적단백균가발생정학적항원-항체결합반응,표체량체956mg/L.장발효액상청진행N-당기화분석,현시rPST무N-당기화가공수식.
