应用与环境生物学报
應用與環境生物學報
응용여배경생물학보
CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY
2001年
3期
207-212
,共6页
吕泽勋%李久蒂%朱至清
呂澤勛%李久蒂%硃至清
려택훈%리구체%주지청
玉米%内生固氮菌%回接分离%绿色荧光蛋白基因%定殖
玉米%內生固氮菌%迴接分離%綠色熒光蛋白基因%定殖
옥미%내생고담균%회접분리%록색형광단백기인%정식
对从玉米茎内分离的18株固氮菌进行了回接分离试验，经多碳源无氮培养基、菌落形态、颜色与REP-PCR相结合的方法，筛选、鉴定出了两株具有较高乙炔还原活性和能在玉米体内定殖的菌株R1和R6.把携带gfp标记基因的质粒pKK223-GFP和nifH-gfp的质粒pMGFP2.1分别转化R1和R6，得到携带gfp，且菌落带绿色荧光的转化子R1A和R6A，以及携带nifH-gfp的转化子R1B和R6B.在限菌条件下对R1A和R6A在玉米根内的定殖以及R1B和R6B中nifH-gfp融合基因的表达进行了研究，结果表明了R1A和R6A主要定殖在根的皮层细胞、胞间隙、中柱细胞和导管内，有时在活的细胞内也可检测到.R1B和R6B中的融合基因因受玉米根内营养以及其它与固氮酶基因表达相关因素的限制，很难在玉米根内表达，只有在添加了1‰蔗糖后，nifH-gfp才能在根内表达. 图2 表2 参15
對從玉米莖內分離的18株固氮菌進行瞭迴接分離試驗，經多碳源無氮培養基、菌落形態、顏色與REP-PCR相結閤的方法，篩選、鑒定齣瞭兩株具有較高乙炔還原活性和能在玉米體內定殖的菌株R1和R6.把攜帶gfp標記基因的質粒pKK223-GFP和nifH-gfp的質粒pMGFP2.1分彆轉化R1和R6，得到攜帶gfp，且菌落帶綠色熒光的轉化子R1A和R6A，以及攜帶nifH-gfp的轉化子R1B和R6B.在限菌條件下對R1A和R6A在玉米根內的定殖以及R1B和R6B中nifH-gfp融閤基因的錶達進行瞭研究，結果錶明瞭R1A和R6A主要定殖在根的皮層細胞、胞間隙、中柱細胞和導管內，有時在活的細胞內也可檢測到.R1B和R6B中的融閤基因因受玉米根內營養以及其它與固氮酶基因錶達相關因素的限製，很難在玉米根內錶達，隻有在添加瞭1‰蔗糖後，nifH-gfp纔能在根內錶達. 圖2 錶2 參15
대종옥미경내분리적18주고담균진행료회접분리시험，경다탄원무담배양기、균락형태、안색여REP-PCR상결합적방법，사선、감정출료량주구유교고을결환원활성화능재옥미체내정식적균주R1화R6.파휴대gfp표기기인적질립pKK223-GFP화nifH-gfp적질립pMGFP2.1분별전화R1화R6，득도휴대gfp，차균락대록색형광적전화자R1A화R6A，이급휴대nifH-gfp적전화자R1B화R6B.재한균조건하대R1A화R6A재옥미근내적정식이급R1B화R6B중nifH-gfp융합기인적표체진행료연구，결과표명료R1A화R6A주요정식재근적피층세포、포간극、중주세포화도관내，유시재활적세포내야가검측도.R1B화R6B중적융합기인인수옥미근내영양이급기타여고담매기인표체상관인소적한제，흔난재옥미근내표체，지유재첨가료1‰자당후，nifH-gfp재능재근내표체. 도2 표2 삼15
