CAJ | 학술논문

目的构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础.方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA.PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiⅠ酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4～4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30%左右,1kb～500bp占69%.结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库.
목적구건화지고흡충낭유cDNA표체문고,위사선특이진단항원화역묘후선항원전정기출.방법제취화지고흡충낭유총RNA;용Clontech공사SMARTTM cDNA문고구건시제합병안기조작방법진행,진행반전록합성쌍련cDNA.PCR산물경단백매K소화、순화후,진행SfiⅠ매절;용ChromaSpin 400주장매절산물진행분급분리,경1.1%경지당응효전영감정,회수0.4～4kb적조분,병여λTriplEx2재체련접;련접산물경체외단백포장,산생미확증문고;검측미확증문고적도화중조효솔후,진행문고적확증,병측정확증문고적적도;수궤도취9개서균반,용재체극륭위점량단적인물진행PCR확증,이검측소구건적cDNA문고적질량.결과미확증문고적도체7.0×107pfu/ml,확증문고적도체2.5×108pfu/ml;용재체량단적인물진행PCR감정,결과현시:확증문고중,함1kb이상적점30%좌우,1kb～500bp점69%.결론이성공지획득일고질량적화지고흡충낭유cDNA표체문고.