中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2002年
4期
411-415
,共5页
李现亭%莫晓宁%夏东岚%刘雅楠%宋泉声%张颖妹%马大龙
李現亭%莫曉寧%夏東嵐%劉雅楠%宋泉聲%張穎妹%馬大龍
리현정%막효저%하동람%류아남%송천성%장영매%마대룡
TF-1细胞凋亡相关基因19(TFAR19),缺失突变体,GST,纯化
TF-1細胞凋亡相關基因19(TFAR19),缺失突變體,GST,純化
TF-1세포조망상관기인19(TFAR19),결실돌변체,GST,순화
构建TF-1细胞凋亡相关基因19(TF-1 cell apoptosis related gene-19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体,获取缺失突变体蛋白,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究.从真核表达载体pcDI-TFAR19扩增出野生型TFAR19和4个缺失突变体,重组到原核表达载体pGEX-4T-2.经亲和层析方法对缺失体蛋白进行纯化后,再利用凝胶过滤的方法进一步纯化.利用抗GST和抗TFAR19的单克隆抗体对蛋白进行免疫学鉴定.用白血病细胞株HL-60检测蛋白活性.成功地克隆并重组了野生型TFAR19及缺失突变体-pGEX-4T-2表达载体,对融合蛋白的表达条件进行了优化.SDS-PAGE结果显示,各个缺失突变体融合蛋白均有较高水平的表达.免疫学检测证实获得了正确的表达产物.活性检测证实,野生型TFAR19和缺失突变体4可以明显促进去血清诱导的HL-60细胞凋亡,第6外显子可能是一个与TFAR19促凋亡活性密切相关的功能结构域.
構建TF-1細胞凋亡相關基因19(TF-1 cell apoptosis related gene-19,TFAR19)缺失突變體的原覈錶達載體,穫取缺失突變體蛋白,用于TFAR19促凋亡分子機理的研究.從真覈錶達載體pcDI-TFAR19擴增齣野生型TFAR19和4箇缺失突變體,重組到原覈錶達載體pGEX-4T-2.經親和層析方法對缺失體蛋白進行純化後,再利用凝膠過濾的方法進一步純化.利用抗GST和抗TFAR19的單剋隆抗體對蛋白進行免疫學鑒定.用白血病細胞株HL-60檢測蛋白活性.成功地剋隆併重組瞭野生型TFAR19及缺失突變體-pGEX-4T-2錶達載體,對融閤蛋白的錶達條件進行瞭優化.SDS-PAGE結果顯示,各箇缺失突變體融閤蛋白均有較高水平的錶達.免疫學檢測證實穫得瞭正確的錶達產物.活性檢測證實,野生型TFAR19和缺失突變體4可以明顯促進去血清誘導的HL-60細胞凋亡,第6外顯子可能是一箇與TFAR19促凋亡活性密切相關的功能結構域.
구건TF-1세포조망상관기인19(TF-1 cell apoptosis related gene-19,TFAR19)결실돌변체적원핵표체재체,획취결실돌변체단백,용우TFAR19촉조망분자궤리적연구.종진핵표체재체pcDI-TFAR19확증출야생형TFAR19화4개결실돌변체,중조도원핵표체재체pGEX-4T-2.경친화층석방법대결실체단백진행순화후,재이용응효과려적방법진일보순화.이용항GST화항TFAR19적단극륭항체대단백진행면역학감정.용백혈병세포주HL-60검측단백활성.성공지극륭병중조료야생형TFAR19급결실돌변체-pGEX-4T-2표체재체,대융합단백적표체조건진행료우화.SDS-PAGE결과현시,각개결실돌변체융합단백균유교고수평적표체.면역학검측증실획득료정학적표체산물.활성검측증실,야생형TFAR19화결실돌변체4가이명현촉진거혈청유도적HL-60세포조망,제6외현자가능시일개여TFAR19촉조망활성밀절상관적공능결구역.
