中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2002年
3期
138-142
,共5页
范立强%施惠娟%贺华君%袁勤生%杨冠珍%吴祥甫
範立彊%施惠娟%賀華君%袁勤生%楊冠珍%吳祥甫
범립강%시혜연%하화군%원근생%양관진%오상보
肉碱%脱水酶%基因%克隆%表达%大肠杆菌
肉堿%脫水酶%基因%剋隆%錶達%大腸桿菌
육감%탈수매%기인%극륭%표체%대장간균
目的克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因.方法用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB,测定其DNA序列,将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pETCaiB,转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果克隆得到的肉碱脱水酶编码基因caiB长度为1221bp,与文献报道值相比,DNA序列有26个不同,氨基酸序列只有一个不同,即302位的丙氨酸变为苏氨酸.重组菌经IPTG诱导,可高效表达,SDS-PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000,表达产物含量占菌体总蛋白45%以上.结论得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌,为制备L-肉碱创造了条件.
目的剋隆併錶達大腸桿菌肉堿脫水酶基因.方法用聚閤酶鏈反應(PCR)從大腸桿菌K12s中擴增大腸桿菌肉堿脫水酶基因caiB,測定其DNA序列,將caiB基因重組到T7啟動子控製下的錶達載體pET-28a(+)中,構建錶達質粒pETCaiB,轉化大腸桿菌BL21(DE3),用1mmol/L異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導錶達.結果剋隆得到的肉堿脫水酶編碼基因caiB長度為1221bp,與文獻報道值相比,DNA序列有26箇不同,氨基痠序列隻有一箇不同,即302位的丙氨痠變為囌氨痠.重組菌經IPTG誘導,可高效錶達,SDS-PAGE分析錶達蛋白相對分子質量約43000,錶達產物含量佔菌體總蛋白45%以上.結論得到瞭高效錶達肉堿脫水酶的重組菌,為製備L-肉堿創造瞭條件.
목적극륭병표체대장간균육감탈수매기인.방법용취합매련반응(PCR)종대장간균K12s중확증대장간균육감탈수매기인caiB,측정기DNA서렬,장caiB기인중조도T7계동자공제하적표체재체pET-28a(+)중,구건표체질립pETCaiB,전화대장간균BL21(DE3),용1mmol/L이병기류대-β-D반유당감(IPTG)유도표체.결과극륭득도적육감탈수매편마기인caiB장도위1221bp,여문헌보도치상비,DNA서렬유26개불동,안기산서렬지유일개불동,즉302위적병안산변위소안산.중조균경IPTG유도,가고효표체,SDS-PAGE분석표체단백상대분자질량약43000,표체산물함량점균체총단백45%이상.결론득도료고효표체육감탈수매적중조균,위제비L-육감창조료조건.
