CAJ | 학술논문

背景与目的:增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)在食管鳞癌患者中的高表达提示患者的预后不良.本研究拟通过基因反义封闭技术体外抑制PCNA的表达,以达到抑制肿瘤细胞恶性增殖的目的.方法:以食管鳞癌T.Tn细胞株为研究对象,采用硫代磷酸修饰的PCNA反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN),通过脂质体导入T.Tn细胞后,观察PCNAASODN对T.Tn细胞癌基因表达及体外增殖活性的影响.结果:相差显微镜下观察到T.Tn细胞转染ASODN后细胞体积变小,皱缩变形的细胞较对照组明显减少.MTT法测细胞增殖活性见不同浓度ASODN均能抑制T.Tn细胞的增殖,抑制作用在24h最强,0.2μmol/LASODN对细胞的抑制率为63.3%,时间延长抑制作用逐渐减弱.3H-TdR掺入实验表明ASODN能有效地抑制T.Tn细胞的DNA合成.免疫组化SABC法染色提示转染ASODN后T.Tn细胞mRNA的翻译受到抑制,PCNA蛋白表达水平明显降低.FCM检测发现G0-G1期细胞含量由对照组的53.65%增至72.34%,而G2-M和S期细胞则分别从15.51%、30.84%降到9.87%、17.79%.表明PCNAASODN转染导致PCNA促进细胞增殖的功能降低,抑制处于G0期的细胞进入S期.结论:使用人工合成的PCNAASODN可以特异性地抑制食管鳞癌T.Tn细胞株PCNA蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制细胞增殖.
배경여목적:증식세포핵항원(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)재식관린암환자중적고표체제시환자적예후불량.본연구의통과기인반의봉폐기술체외억제PCNA적표체,이체도억제종류세포악성증식적목적.방법:이식관린암T.Tn세포주위연구대상,채용류대린산수식적PCNA반의과핵감산(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN),통과지질체도입T.Tn세포후,관찰PCNAASODN대T.Tn세포암기인표체급체외증식활성적영향.결과:상차현미경하관찰도T.Tn세포전염ASODN후세포체적변소,추축변형적세포교대조조명현감소.MTT법측세포증식활성견불동농도ASODN균능억제T.Tn세포적증식,억제작용재24h최강,0.2μmol/LASODN대세포적억제솔위63.3%,시간연장억제작용축점감약.3H-TdR참입실험표명ASODN능유효지억제T.Tn세포적DNA합성.면역조화SABC법염색제시전염ASODN후T.Tn세포mRNA적번역수도억제,PCNA단백표체수평명현강저.FCM검측발현G0-G1기세포함량유대조조적53.65%증지72.34%,이G2-M화S기세포칙분별종15.51%、30.84%강도9.87%、17.79%.표명PCNAASODN전염도치PCNA촉진세포증식적공능강저,억제처우G0기적세포진입S기.결론:사용인공합성적PCNAASODN가이특이성지억제식관린암T.Tn세포주PCNA단백적표체,종이조공세포주기,억제세포증식.