生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
2期
187-192
,共6页
王卓华%叶凯%徐洪%马辉文%童立恒%彭习亮
王卓華%葉凱%徐洪%馬輝文%童立恆%彭習亮
왕탁화%협개%서홍%마휘문%동립항%팽습량
庚型肝炎病毒%E2膜蛋白%巴斯德毕赤氏酵母%表达%抗原性
庚型肝炎病毒%E2膜蛋白%巴斯德畢赤氏酵母%錶達%抗原性
경형간염병독%E2막단백%파사덕필적씨효모%표체%항원성
利用PCR技术,从含有庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)包膜蛋白E2 cDNA(559bp)的质粒pGEX-E2中,扩增得到能够编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)和GBV-C/HGV包膜蛋白E2的融合基因片段.将此长度为1324bp的DNA片段插入到酵母表达载体pPIC9K中,使之位于α-因子信号肽下游,且与之同框.通过电激转化将构建的重组表达质粒pPIC9K-GST-E2插入到Pichia pastoris GS115菌株染色体中.筛选His+Mut.表型的转化子,震荡培养,用0.5%甲醇诱导表达5d后,在培养液中得到表达的GST-E2融合蛋白.经过表达条件的优化,GST-E2蛋白可占培养液中总蛋白的50%.通过谷胱甘肽亲和层析柱纯化,GST-E2融合蛋白的纯度可达95%左右.以庚型肝炎病人血清为探针,进行免疫印迹及ELISA实验,结果表明该融合蛋白具有能被庚型肝炎病人血清特异性识别的抗原性.
利用PCR技術,從含有庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)包膜蛋白E2 cDNA(559bp)的質粒pGEX-E2中,擴增得到能夠編碼日本血吸蟲穀胱甘肽硫轉移酶(GST)和GBV-C/HGV包膜蛋白E2的融閤基因片段.將此長度為1324bp的DNA片段插入到酵母錶達載體pPIC9K中,使之位于α-因子信號肽下遊,且與之同框.通過電激轉化將構建的重組錶達質粒pPIC9K-GST-E2插入到Pichia pastoris GS115菌株染色體中.篩選His+Mut.錶型的轉化子,震盪培養,用0.5%甲醇誘導錶達5d後,在培養液中得到錶達的GST-E2融閤蛋白.經過錶達條件的優化,GST-E2蛋白可佔培養液中總蛋白的50%.通過穀胱甘肽親和層析柱純化,GST-E2融閤蛋白的純度可達95%左右.以庚型肝炎病人血清為探針,進行免疫印跡及ELISA實驗,結果錶明該融閤蛋白具有能被庚型肝炎病人血清特異性識彆的抗原性.
이용PCR기술,종함유경형간염병독(GBV-C/HGV)포막단백E2 cDNA(559bp)적질립pGEX-E2중,확증득도능구편마일본혈흡충곡광감태류전이매(GST)화GBV-C/HGV포막단백E2적융합기인편단.장차장도위1324bp적DNA편단삽입도효모표체재체pPIC9K중,사지위우α-인자신호태하유,차여지동광.통과전격전화장구건적중조표체질립pPIC9K-GST-E2삽입도Pichia pastoris GS115균주염색체중.사선His+Mut.표형적전화자,진탕배양,용0.5%갑순유도표체5d후,재배양액중득도표체적GST-E2융합단백.경과표체조건적우화,GST-E2단백가점배양액중총단백적50%.통과곡광감태친화층석주순화,GST-E2융합단백적순도가체95%좌우.이경형간염병인혈청위탐침,진행면역인적급ELISA실험,결과표명해융합단백구유능피경형간염병인혈청특이성식별적항원성.
