科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2001年
17期
1440-1444
,共5页
冯丽冰%杨立敏%周伟国%黄莉%万敏%赵寿元%李昌本
馮麗冰%楊立敏%週偉國%黃莉%萬敏%趙壽元%李昌本
풍려빙%양립민%주위국%황리%만민%조수원%리창본
血小板生成素受体c-Mpl%酵母双杂合系统%SGK蛋白%14-3-3蛋白%相互作用
血小闆生成素受體c-Mpl%酵母雙雜閤繫統%SGK蛋白%14-3-3蛋白%相互作用
혈소판생성소수체c-Mpl%효모쌍잡합계통%SGK단백%14-3-3단백%상호작용
血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是调节血小板生成最主要的细胞因子,它的生物学效应由其受体c-Mpl介导.用酵母双杂合系统(two-hybrid system)筛选了与c-Mpl膜内部分相互作用的蛋白质.在5×106个转化子中,得到48个阳性克隆.测序结果表明,其中一个是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SGK(serum and glucocorticoid-inducible kinase)的部分编码序列(编码第246位氨基酸至c末端,包括3′端非编码区);另一个为14-3-3 theta亚型蛋白的部分编码序列(编码第67位氨基酸至C末端,包括3′端非编码区).体外GST-Pulldown分析和免疫共沉淀进一步证实了c-Mpl与它们的相互作用.通过系列缺失研究发现两个蛋白与c-Mpl相互作用的区域都在523～554 aa范围内.用酵母双杂合系统进一步研究SGK和14-3-3蛋白之间的关系,发现两者可能直接相互作用.SGK和14-3-3蛋白可能与TPO/MPL信号传导过程中的丝氨酸/苏氨酸磷酸化有关.
血小闆生成素(thrombopoietin,TPO)是調節血小闆生成最主要的細胞因子,它的生物學效應由其受體c-Mpl介導.用酵母雙雜閤繫統(two-hybrid system)篩選瞭與c-Mpl膜內部分相互作用的蛋白質.在5×106箇轉化子中,得到48箇暘性剋隆.測序結果錶明,其中一箇是絲氨痠/囌氨痠蛋白激酶SGK(serum and glucocorticoid-inducible kinase)的部分編碼序列(編碼第246位氨基痠至c末耑,包括3′耑非編碼區);另一箇為14-3-3 theta亞型蛋白的部分編碼序列(編碼第67位氨基痠至C末耑,包括3′耑非編碼區).體外GST-Pulldown分析和免疫共沉澱進一步證實瞭c-Mpl與它們的相互作用.通過繫列缺失研究髮現兩箇蛋白與c-Mpl相互作用的區域都在523～554 aa範圍內.用酵母雙雜閤繫統進一步研究SGK和14-3-3蛋白之間的關繫,髮現兩者可能直接相互作用.SGK和14-3-3蛋白可能與TPO/MPL信號傳導過程中的絲氨痠/囌氨痠燐痠化有關.
혈소판생성소(thrombopoietin,TPO)시조절혈소판생성최주요적세포인자,타적생물학효응유기수체c-Mpl개도.용효모쌍잡합계통(two-hybrid system)사선료여c-Mpl막내부분상호작용적단백질.재5×106개전화자중,득도48개양성극륭.측서결과표명,기중일개시사안산/소안산단백격매SGK(serum and glucocorticoid-inducible kinase)적부분편마서렬(편마제246위안기산지c말단,포괄3′단비편마구);령일개위14-3-3 theta아형단백적부분편마서렬(편마제67위안기산지C말단,포괄3′단비편마구).체외GST-Pulldown분석화면역공침정진일보증실료c-Mpl여타문적상호작용.통과계렬결실연구발현량개단백여c-Mpl상호작용적구역도재523～554 aa범위내.용효모쌍잡합계통진일보연구SGK화14-3-3단백지간적관계,발현량자가능직접상호작용.SGK화14-3-3단백가능여TPO/MPL신호전도과정중적사안산/소안산린산화유관.
