生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
5期
667-672
,共6页
赵岩%王清明%付学奇%陈吉中%范国才%陈惠鹏
趙巖%王清明%付學奇%陳吉中%範國纔%陳惠鵬
조암%왕청명%부학기%진길중%범국재%진혜붕
MCF-7,单链抗体(scFv),噬菌体抗体库,筛选,表达
MCF-7,單鏈抗體(scFv),噬菌體抗體庫,篩選,錶達
MCF-7,단련항체(scFv),서균체항체고,사선,표체
构建抗人乳腺癌细胞MCF-7的噬菌体单链抗体库,从中筛选MCF-7细胞特异性单链抗体.用MCF-7细胞免疫BALB/C小鼠,取脾脏,提取总RNA,用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,经重叠PCR(SOE-PCR),在体外将VH和VL连接成单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,电转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体超感染,构建噬菌体单链抗体库.从该抗体库中筛选特异性识别MCF-7细胞的噬菌体单链抗体,将表面展示单链抗体的单克隆噬菌体转化大肠杆菌TOP10进行可溶性表达.成功地构建了库容为1.2× 106的抗MCF-7乳腺癌细胞的单链抗体库,初步筛选到了与MCF-7细胞特异性结合的scFv,Western blot检测表明,在大肠杆菌TOP10中实现了单链抗体可溶性表达.
構建抗人乳腺癌細胞MCF-7的噬菌體單鏈抗體庫,從中篩選MCF-7細胞特異性單鏈抗體.用MCF-7細胞免疫BALB/C小鼠,取脾髒,提取總RNA,用RT-PCR技術擴增小鼠抗體重鏈(VH)和輕鏈(VL)可變區基因,經重疊PCR(SOE-PCR),在體外將VH和VL連接成單鏈抗體(scFv)基因,併剋隆到噬菌粒載體pCANTAB5E中,電轉化至大腸桿菌TG1,經輔助噬菌體超感染,構建噬菌體單鏈抗體庫.從該抗體庫中篩選特異性識彆MCF-7細胞的噬菌體單鏈抗體,將錶麵展示單鏈抗體的單剋隆噬菌體轉化大腸桿菌TOP10進行可溶性錶達.成功地構建瞭庫容為1.2× 106的抗MCF-7乳腺癌細胞的單鏈抗體庫,初步篩選到瞭與MCF-7細胞特異性結閤的scFv,Western blot檢測錶明,在大腸桿菌TOP10中實現瞭單鏈抗體可溶性錶達.
구건항인유선암세포MCF-7적서균체단련항체고,종중사선MCF-7세포특이성단련항체.용MCF-7세포면역BALB/C소서,취비장,제취총RNA,용RT-PCR기술확증소서항체중련(VH)화경련(VL)가변구기인,경중첩PCR(SOE-PCR),재체외장VH화VL련접성단련항체(scFv)기인,병극륭도서균립재체pCANTAB5E중,전전화지대장간균TG1,경보조서균체초감염,구건서균체단련항체고.종해항체고중사선특이성식별MCF-7세포적서균체단련항체,장표면전시단련항체적단극륭서균체전화대장간균TOP10진행가용성표체.성공지구건료고용위1.2× 106적항MCF-7유선암세포적단련항체고,초보사선도료여MCF-7세포특이성결합적scFv,Western blot검측표명,재대장간균TOP10중실현료단련항체가용성표체.
