华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2004年
6期
593-596
,共4页
寇铮%陈绳亮%钟靖%李天宪%喻子牛
寇錚%陳繩亮%鐘靖%李天憲%喻子牛
구쟁%진승량%종정%리천헌%유자우
鹦鹉幼雏病病毒(BFDV)%结构蛋白(VP1)%克隆与原核表达
鸚鵡幼雛病病毒(BFDV)%結構蛋白(VP1)%剋隆與原覈錶達
앵무유추병병독(BFDV)%결구단백(VP1)%극륭여원핵표체
采用湖北省云梦县患鹦鹉幼雏病死亡的虎皮鹦鹉体内分离得到的鹦鹉幼雏病毒(budgerigar fledgling disease virus,BFDV),应用PCR方法获得BFDV主要结构蛋白基因(VP1),克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒pMD18T-VP1并进行测序,结果显示,结构蛋白基因(VP1)与BFDV欧美分离株的同源性为96%～99%,表明VP1是BFDV保守基因;将VP1亚克隆到原核表达载体pET32(+)b,构建重组质粒pET32(+)b-VP1,转化菌株BL21(DE3),诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析,克隆在his-tag下游的结构蛋白基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白分子量约为55 kD.为建立快速、灵敏的鹦鹉幼雏病毒血清学检测方法以及研制基因工程疫苗提供了科学依据.
採用湖北省雲夢縣患鸚鵡幼雛病死亡的虎皮鸚鵡體內分離得到的鸚鵡幼雛病毒(budgerigar fledgling disease virus,BFDV),應用PCR方法穫得BFDV主要結構蛋白基因(VP1),剋隆到pMD18-T載體,構建重組質粒pMD18T-VP1併進行測序,結果顯示,結構蛋白基因(VP1)與BFDV歐美分離株的同源性為96%～99%,錶明VP1是BFDV保守基因;將VP1亞剋隆到原覈錶達載體pET32(+)b,構建重組質粒pET32(+)b-VP1,轉化菌株BL21(DE3),誘導錶達,經SDS-PAGE和Western-blot分析,剋隆在his-tag下遊的結構蛋白基因穫得瞭高效融閤錶達,錶達的融閤蛋白分子量約為55 kD.為建立快速、靈敏的鸚鵡幼雛病毒血清學檢測方法以及研製基因工程疫苗提供瞭科學依據.
채용호북성운몽현환앵무유추병사망적호피앵무체내분리득도적앵무유추병독(budgerigar fledgling disease virus,BFDV),응용PCR방법획득BFDV주요결구단백기인(VP1),극륭도pMD18-T재체,구건중조질립pMD18T-VP1병진행측서,결과현시,결구단백기인(VP1)여BFDV구미분리주적동원성위96%～99%,표명VP1시BFDV보수기인;장VP1아극륭도원핵표체재체pET32(+)b,구건중조질립pET32(+)b-VP1,전화균주BL21(DE3),유도표체,경SDS-PAGE화Western-blot분석,극륭재his-tag하유적결구단백기인획득료고효융합표체,표체적융합단백분자량약위55 kD.위건립쾌속、령민적앵무유추병독혈청학검측방법이급연제기인공정역묘제공료과학의거.
