中国生物医学工程学报
中國生物醫學工程學報
중국생물의학공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOMEDICAL ENGINEERING
2005年
4期
498-502
,共5页
α1,3-半乳糖基转移酶基因%基因打靶%人白细胞抗原HLA-G1
α1,3-半乳糖基轉移酶基因%基因打靶%人白細胞抗原HLA-G1
α1,3-반유당기전이매기인%기인타파%인백세포항원HLA-G1
本实验室已克隆到猪α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-GT, 第九外显子不全).其中pMD-3arm载体上有5.0kb的片段,该片段包括了小部分第8外显子,完整的第8内含子和一部分第9外显子.本实验中利用LA-PCR的方法,从猪的基因组中获得约2.0kb的猪α1,3-GT的第9外显子序列的扩增产物, 将片段克隆于pGEM-Teasy 载体.将5.0kb和2.0kb片段分别作为打靶载体的5′,3′同源臂,以neo为正选择标记基因,以GFP为负选择标记基因,构建敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLA-G1基因的的打靶载体p ZJ.经酶切图谱和测序结果的鉴定成功地构建出敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因并同时能表达人白细胞抗原HLA-G1基因的正负双向选择的打靶载体,为异种器官移植提供了很好的探索.
本實驗室已剋隆到豬α1,3-半乳糖基轉移酶基因(α1,3-GT, 第九外顯子不全).其中pMD-3arm載體上有5.0kb的片段,該片段包括瞭小部分第8外顯子,完整的第8內含子和一部分第9外顯子.本實驗中利用LA-PCR的方法,從豬的基因組中穫得約2.0kb的豬α1,3-GT的第9外顯子序列的擴增產物, 將片段剋隆于pGEM-Teasy 載體.將5.0kb和2.0kb片段分彆作為打靶載體的5′,3′同源臂,以neo為正選擇標記基因,以GFP為負選擇標記基因,構建敲除豬α1,3-半乳糖基轉移酶基因併同時能錶達人白細胞抗原HLA-G1基因的的打靶載體p ZJ.經酶切圖譜和測序結果的鑒定成功地構建齣敲除豬α1,3-半乳糖基轉移酶基因併同時能錶達人白細胞抗原HLA-G1基因的正負雙嚮選擇的打靶載體,為異種器官移植提供瞭很好的探索.
본실험실이극륭도저α1,3-반유당기전이매기인(α1,3-GT, 제구외현자불전).기중pMD-3arm재체상유5.0kb적편단,해편단포괄료소부분제8외현자,완정적제8내함자화일부분제9외현자.본실험중이용LA-PCR적방법,종저적기인조중획득약2.0kb적저α1,3-GT적제9외현자서렬적확증산물, 장편단극륭우pGEM-Teasy 재체.장5.0kb화2.0kb편단분별작위타파재체적5′,3′동원비,이neo위정선택표기기인,이GFP위부선택표기기인,구건고제저α1,3-반유당기전이매기인병동시능표체인백세포항원HLA-G1기인적적타파재체p ZJ.경매절도보화측서결과적감정성공지구건출고제저α1,3-반유당기전이매기인병동시능표체인백세포항원HLA-G1기인적정부쌍향선택적타파재체,위이충기관이식제공료흔호적탐색.
