中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
99-102
,共4页
张青%张思河%苏明权%沈建军%韦晓明%郝晓柯
張青%張思河%囌明權%瀋建軍%韋曉明%郝曉柯
장청%장사하%소명권%침건군%위효명%학효가
γ-精浆蛋白%亲和层析%糖基化
γ-精漿蛋白%親和層析%糖基化
γ-정장단백%친화층석%당기화
目的:从人精液中提纯γ-精浆蛋白并对其生物学特性进行鉴定.方法:应用饱和硫酸铵法从小鼠腹水中纯化出抗γ-精浆蛋白的单克隆抗体E4B7,将其共价交联到CNBr-Sepharose4B上,制备成免疫亲和层析柱,用该层析柱亲和纯化经饱和硫酸铵粗提的精液标本.纯化产物分别用SDS-PAGE、Western-blot及ELISA进行生物学特性鉴定,最后经PNGase F、Endo-H酶消化后进行糖基化分析.结果:SDS-PAGE电泳表明纯化蛋白的相对分子量约为44kDa,Western-blot及ELISA鉴定显示该蛋白可与抗γ-精浆蛋白的单抗E4B7特异性结合.对纯化蛋白无论是单用Endo-H酶消化,还是同时用Endo-H酶和PNGase F酶共同消化,消化产物电泳后相对分子量均降低到34kDa左右,而单独用PNGase F酶消化后相对分子量没有改变.Western-blot及ELISA鉴定显示糖苷酶处理后的纯化蛋白仍可与单抗E4B7特异性结合.结论:成功纯化出N-糖基化形式的γ-精浆蛋白,这为下一步筛选人源化抗体奠定了纯的抗原基础.
目的:從人精液中提純γ-精漿蛋白併對其生物學特性進行鑒定.方法:應用飽和硫痠銨法從小鼠腹水中純化齣抗γ-精漿蛋白的單剋隆抗體E4B7,將其共價交聯到CNBr-Sepharose4B上,製備成免疫親和層析柱,用該層析柱親和純化經飽和硫痠銨粗提的精液標本.純化產物分彆用SDS-PAGE、Western-blot及ELISA進行生物學特性鑒定,最後經PNGase F、Endo-H酶消化後進行糖基化分析.結果:SDS-PAGE電泳錶明純化蛋白的相對分子量約為44kDa,Western-blot及ELISA鑒定顯示該蛋白可與抗γ-精漿蛋白的單抗E4B7特異性結閤.對純化蛋白無論是單用Endo-H酶消化,還是同時用Endo-H酶和PNGase F酶共同消化,消化產物電泳後相對分子量均降低到34kDa左右,而單獨用PNGase F酶消化後相對分子量沒有改變.Western-blot及ELISA鑒定顯示糖苷酶處理後的純化蛋白仍可與單抗E4B7特異性結閤.結論:成功純化齣N-糖基化形式的γ-精漿蛋白,這為下一步篩選人源化抗體奠定瞭純的抗原基礎.
목적:종인정액중제순γ-정장단백병대기생물학특성진행감정.방법:응용포화류산안법종소서복수중순화출항γ-정장단백적단극륭항체E4B7,장기공개교련도CNBr-Sepharose4B상,제비성면역친화층석주,용해층석주친화순화경포화류산안조제적정액표본.순화산물분별용SDS-PAGE、Western-blot급ELISA진행생물학특성감정,최후경PNGase F、Endo-H매소화후진행당기화분석.결과:SDS-PAGE전영표명순화단백적상대분자량약위44kDa,Western-blot급ELISA감정현시해단백가여항γ-정장단백적단항E4B7특이성결합.대순화단백무론시단용Endo-H매소화,환시동시용Endo-H매화PNGase F매공동소화,소화산물전영후상대분자량균강저도34kDa좌우,이단독용PNGase F매소화후상대분자량몰유개변.Western-blot급ELISA감정현시당감매처리후적순화단백잉가여단항E4B7특이성결합.결론:성공순화출N-당기화형식적γ-정장단백,저위하일보사선인원화항체전정료순적항원기출.
