CAJ | 학술논문

目的:克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在cos-7细胞中表达,并初步探讨表达产物体外抗乙肝病毒(HBV)作用.方法:分离外周血单个核细胞;VSV感染后,提取总RNA,通过一步法RT-PCR获得IL-29全长cDNA.DNA测序正确后,将IL-29 cDNA的编码框序列构建到真核表达载体psectagB/His-myc中.氨苄青霉素板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转染cos-7细胞并经潮霉素及有限稀释法筛选稳定表达克隆.SDS-PAGE、Western blot鉴定,Ni2+亲和层析分离纯化得到主带分子量为33 000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白.体外以HepG2.2.2.15为靶细胞观察rhIL-29对HepG2.2.2.15培养上清液中HBV表面抗原(HBsAg)及e抗原(HBeAg)影响.结果:成功获得人IL-29全长cDNA并在cos-7细胞中稳定表达.SDS-PAGE、Western blot分析显示表达的rhIL-29融合蛋白为几个蛋白质区带,分子量在20 000～33 000之间纯化的rhIL-29融合蛋白,主带在33 000附近.rhIL-29融合蛋白具有抑制HBsAg及HBeAg分泌作用并且具有剂量效应,抑制率分别达85%.结论:获得具有生物活性的rhIL-29融合蛋白.rhIL-29融合蛋白在体外具有抑制HepG2.2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg作用.
목적:극륭인세포인자IL-29전장cDNA급기재cos-7세포중표체,병초보탐토표체산물체외항을간병독(HBV)작용.방법:분리외주혈단개핵세포;VSV감염후,제취총RNA,통과일보법RT-PCR획득IL-29전장cDNA.DNA측서정학후,장IL-29 cDNA적편마광서렬구건도진핵표체재체psectagB/His-myc중.안변청매소판사선급PCR감정,도출양성극륭진행확증、전염cos-7세포병경조매소급유한희석법사선은정표체극륭.SDS-PAGE、Western blot감정,Ni2+친화층석분리순화득도주대분자량위33 000조안산표첨중조인IL-29융합단백.체외이HepG2.2.2.15위파세포관찰rhIL-29대HepG2.2.2.15배양상청액중HBV표면항원(HBsAg)급e항원(HBeAg)영향.결과:성공획득인IL-29전장cDNA병재cos-7세포중은정표체.SDS-PAGE、Western blot분석현시표체적rhIL-29융합단백위궤개단백질구대,분자량재20 000～33 000지간순화적rhIL-29융합단백,주대재33 000부근.rhIL-29융합단백구유억제HBsAg급HBeAg분비작용병차구유제량효응,억제솔분별체85%.결론:획득구유생물활성적rhIL-29융합단백.rhIL-29융합단백재체외구유억제HepG2.2.2.15세포분비HBsAg급HBeAg작용.