中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2007年
5期
742-746
,共5页
周小莹%暨明%刘君彦%谭孟群
週小瑩%暨明%劉君彥%譚孟群
주소형%기명%류군언%담맹군
重组腺相关病毒2型%GFP%树突状细胞%基因转导
重組腺相關病毒2型%GFP%樹突狀細胞%基因轉導
중조선상관병독2형%GFP%수돌상세포%기인전도
目的:在诱导人骨髓CD34+细胞分化成树突状细胞(dendritic cells,DCs)的基础上,探讨2型重组腺相关病毒(Type 2 recombinant adeno-associated virus,rAAV2)载体介导绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因转染DCs的条件.方法:采用免疫磁珠法分离纯化人骨髓来源的CD34+细胞.在含有IL-4和GM-CSF的培养体系中体外诱导CD34+细胞生成DCs,于第5天加入TNF-α诱导DCs成熟,在不同时间用rAAV2载体介导GFP基因转染未成熟和成熟的DCs.通过电子显微镜和流式细胞仪鉴定树突状细胞,荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达.结果:人骨髓CD34+细胞经诱导分化后,在光镜及透射电镜下均可观察到DCs的形态特征,流式细胞仪检测到DCs表型;荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞培养第3天、第5天和加入TNF-α后的rAAV2-GFP转染率分别为0.45%,13.54%和0.25%.结论:本实验中所采用的培养体系可成功将人骨髓CD34+细胞诱导分化成DCs,rAAV2/GFP转染DCs效率随细胞诱导分化时间的延长而增高,且转染未成熟DCs的效率高于转染成熟DCs.
目的:在誘導人骨髓CD34+細胞分化成樹突狀細胞(dendritic cells,DCs)的基礎上,探討2型重組腺相關病毒(Type 2 recombinant adeno-associated virus,rAAV2)載體介導綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因轉染DCs的條件.方法:採用免疫磁珠法分離純化人骨髓來源的CD34+細胞.在含有IL-4和GM-CSF的培養體繫中體外誘導CD34+細胞生成DCs,于第5天加入TNF-α誘導DCs成熟,在不同時間用rAAV2載體介導GFP基因轉染未成熟和成熟的DCs.通過電子顯微鏡和流式細胞儀鑒定樹突狀細胞,熒光顯微鏡及流式細胞儀檢測GFP的錶達.結果:人骨髓CD34+細胞經誘導分化後,在光鏡及透射電鏡下均可觀察到DCs的形態特徵,流式細胞儀檢測到DCs錶型;熒光顯微鏡及流式細胞儀檢測細胞培養第3天、第5天和加入TNF-α後的rAAV2-GFP轉染率分彆為0.45%,13.54%和0.25%.結論:本實驗中所採用的培養體繫可成功將人骨髓CD34+細胞誘導分化成DCs,rAAV2/GFP轉染DCs效率隨細胞誘導分化時間的延長而增高,且轉染未成熟DCs的效率高于轉染成熟DCs.
목적:재유도인골수CD34+세포분화성수돌상세포(dendritic cells,DCs)적기출상,탐토2형중조선상관병독(Type 2 recombinant adeno-associated virus,rAAV2)재체개도록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)기인전염DCs적조건.방법:채용면역자주법분리순화인골수래원적CD34+세포.재함유IL-4화GM-CSF적배양체계중체외유도CD34+세포생성DCs,우제5천가입TNF-α유도DCs성숙,재불동시간용rAAV2재체개도GFP기인전염미성숙화성숙적DCs.통과전자현미경화류식세포의감정수돌상세포,형광현미경급류식세포의검측GFP적표체.결과:인골수CD34+세포경유도분화후,재광경급투사전경하균가관찰도DCs적형태특정,류식세포의검측도DCs표형;형광현미경급류식세포의검측세포배양제3천、제5천화가입TNF-α후적rAAV2-GFP전염솔분별위0.45%,13.54%화0.25%.결론:본실험중소채용적배양체계가성공장인골수CD34+세포유도분화성DCs,rAAV2/GFP전염DCs효솔수세포유도분화시간적연장이증고,차전염미성숙DCs적효솔고우전염성숙DCs.
