生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
5期
844-850
,共7页
于金龙%王静%李剑欣%郭长江%黄英武%徐琪寿
于金龍%王靜%李劍訢%郭長江%黃英武%徐琪壽
우금룡%왕정%리검흔%곽장강%황영무%서기수
aroG和trpED共表达%trpR和tnaA双敲除%色氨酸
aroG和trpED共錶達%trpR和tnaA雙敲除%色氨痠
aroG화trpED공표체%trpR화tnaA쌍고제%색안산
为了通过基因工程手段提高大肠杆菌色氨酸产量, 对色氨酸生物合成途径中的关键基因trpR、tnaA、aroG和trpED进行了改造.首先通过敲除trpR基因解除了基因组上色氨酸合成和转运关键酶受到的反馈阻遏调控, 进而又敲除了tnaA基因, 阻断了色氨酸的分解代谢.然后, 将色氨酸合成途径的关键酶aroGfbr和trpEDfbr基因串联表达, 以去除色氨酸生物合成途径的瓶颈.与对照MG1655相比, trpR基因单敲菌色氨酸浓度提高了10倍, 双敲菌色氨酸浓度提高了约20倍.pZE12-trpEDfbr转入双敲菌后色氨酸浓度提高到168 mg/L, 而将aroGfbr和trpEDfbr转入双敲菌后, 色氨酸浓度提高到820 mg/L.为构建色氨酸高产菌奠定了基础.
為瞭通過基因工程手段提高大腸桿菌色氨痠產量, 對色氨痠生物閤成途徑中的關鍵基因trpR、tnaA、aroG和trpED進行瞭改造.首先通過敲除trpR基因解除瞭基因組上色氨痠閤成和轉運關鍵酶受到的反饋阻遏調控, 進而又敲除瞭tnaA基因, 阻斷瞭色氨痠的分解代謝.然後, 將色氨痠閤成途徑的關鍵酶aroGfbr和trpEDfbr基因串聯錶達, 以去除色氨痠生物閤成途徑的瓶頸.與對照MG1655相比, trpR基因單敲菌色氨痠濃度提高瞭10倍, 雙敲菌色氨痠濃度提高瞭約20倍.pZE12-trpEDfbr轉入雙敲菌後色氨痠濃度提高到168 mg/L, 而將aroGfbr和trpEDfbr轉入雙敲菌後, 色氨痠濃度提高到820 mg/L.為構建色氨痠高產菌奠定瞭基礎.
위료통과기인공정수단제고대장간균색안산산량, 대색안산생물합성도경중적관건기인trpR、tnaA、aroG화trpED진행료개조.수선통과고제trpR기인해제료기인조상색안산합성화전운관건매수도적반궤조알조공, 진이우고제료tnaA기인, 조단료색안산적분해대사.연후, 장색안산합성도경적관건매aroGfbr화trpEDfbr기인천련표체, 이거제색안산생물합성도경적병경.여대조MG1655상비, trpR기인단고균색안산농도제고료10배, 쌍고균색안산농도제고료약20배.pZE12-trpEDfbr전입쌍고균후색안산농도제고도168 mg/L, 이장aroGfbr화trpEDfbr전입쌍고균후, 색안산농도제고도820 mg/L.위구건색안산고산균전정료기출.
