中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2009年
3期
618-621
,共4页
王毅飞%邢飞跃%蔡德鸿%陈宏%莫永炎%伊娜
王毅飛%邢飛躍%蔡德鴻%陳宏%莫永炎%伊娜
왕의비%형비약%채덕홍%진굉%막영염%이나
糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白%C3H10T1/2细胞%真核表达载体
糖皮質激素誘導亮氨痠拉鏈蛋白%C3H10T1/2細胞%真覈錶達載體
당피질격소유도량안산랍련단백%C3H10T1/2세포%진핵표체재체
目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具. 方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZ cDNA编码区,并将其重组于真核表达载体pcDNA3中.经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过Lipofectamine 2000脂质体和CaCl2方法,分别转染C3H10T1/2和293T细胞,用HA抗体免疫荧光和免疫印迹法检测GILZ在细胞内的表达、分布及分子量大小. 结果:HA-GILZ表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在C3H10T1/2和293T细胞中获得了高效表达.在荧光显微镜下,GILZ主要表达于细胞质内,分子量约20 kD. 结论:成功构建HA-GILZ基因表达载体并表达于C3H10T1/2细胞质中,为GILZ的功能研究奠定了基础.
目的:剋隆、構建HA標籤的糖皮質激素誘導亮氨痠拉鏈蛋白GILZ錶達載體,觀察其在細胞中錶達與定位,為研究GILZ在脂肪細胞分化中的作用提供工具. 方法:採用逆轉錄PCR(RT-PCR)法從C3H10T1/2細胞中擴增帶有HA標籤的GILZ cDNA編碼區,併將其重組于真覈錶達載體pcDNA3中.經酶切、序列鑒定分析後,將該重組質粒通過Lipofectamine 2000脂質體和CaCl2方法,分彆轉染C3H10T1/2和293T細胞,用HA抗體免疫熒光和免疫印跡法檢測GILZ在細胞內的錶達、分佈及分子量大小. 結果:HA-GILZ錶達載體經酶切鑒定和測序分析確認構建成功,併在C3H10T1/2和293T細胞中穫得瞭高效錶達.在熒光顯微鏡下,GILZ主要錶達于細胞質內,分子量約20 kD. 結論:成功構建HA-GILZ基因錶達載體併錶達于C3H10T1/2細胞質中,為GILZ的功能研究奠定瞭基礎.
목적:극륭、구건HA표첨적당피질격소유도량안산랍련단백GILZ표체재체,관찰기재세포중표체여정위,위연구GILZ재지방세포분화중적작용제공공구. 방법:채용역전록PCR(RT-PCR)법종C3H10T1/2세포중확증대유HA표첨적GILZ cDNA편마구,병장기중조우진핵표체재체pcDNA3중.경매절、서렬감정분석후,장해중조질립통과Lipofectamine 2000지질체화CaCl2방법,분별전염C3H10T1/2화293T세포,용HA항체면역형광화면역인적법검측GILZ재세포내적표체、분포급분자량대소. 결과:HA-GILZ표체재체경매절감정화측서분석학인구건성공,병재C3H10T1/2화293T세포중획득료고효표체.재형광현미경하,GILZ주요표체우세포질내,분자량약20 kD. 결론:성공구건HA-GILZ기인표체재체병표체우C3H10T1/2세포질중,위GILZ적공능연구전정료기출.
