中华神经外科疾病研究杂志
中華神經外科疾病研究雜誌
중화신경외과질병연구잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROSURGICAL DISEASE RESEARCH
2009年
2期
127-130
,共4页
王海东%苏新辉%王占祥%马永会%谭国伟
王海東%囌新輝%王佔祥%馬永會%譚國偉
왕해동%소신휘%왕점상%마영회%담국위
PYGO2%RNA干扰%真核表达载体%构建
PYGO2%RNA榦擾%真覈錶達載體%構建
PYGO2%RNA간우%진핵표체재체%구건
目的 构建PYGO2基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以PYGO2为靶基因,以pSUPER.puro质粒为载体,设计构建重组体,根据基因库(GenBank)提供的PYGO2基因核苷酸序列,在http://www.ambion.com网站上使用siRNA Target Finder软件进行目的基凶的siRNA序列对应DNA的设计与筛选,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pSUPER.puro中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pSUPER.puro-PYGO2质粒转染胶质瘤C6细胞48 h,检测其对该细胞PYGO2蛋白的影响.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低胶质瘤细胞PYGO2的蛋白表达,重组载体构建成功.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制PYGO2表达的siRNA真核表达载体.
目的 構建PYGO2基因RNA榦擾(RNAi)的真覈細胞錶達載體.方法 以PYGO2為靶基因,以pSUPER.puro質粒為載體,設計構建重組體,根據基因庫(GenBank)提供的PYGO2基因覈苷痠序列,在http://www.ambion.com網站上使用siRNA Target Finder軟件進行目的基兇的siRNA序列對應DNA的設計與篩選,選擇設計兩條帶髮夾結構的覈苷痠序列,剋隆到空載體pSUPER.puro中,轉化DH5α菌株,提取質粒,進行限製性內切酶酶切鑒定和測序分析,將重組的pSUPER.puro-PYGO2質粒轉染膠質瘤C6細胞48 h,檢測其對該細胞PYGO2蛋白的影響.結果 經酶切鑒定篩選齣的重組體測序結果與目的序列完全一緻,重組載體顯著降低膠質瘤細胞PYGO2的蛋白錶達,重組載體構建成功.結論 利用RNAi技術可成功構建抑製PYGO2錶達的siRNA真覈錶達載體.
목적 구건PYGO2기인RNA간우(RNAi)적진핵세포표체재체.방법 이PYGO2위파기인,이pSUPER.puro질립위재체,설계구건중조체,근거기인고(GenBank)제공적PYGO2기인핵감산서렬,재http://www.ambion.com망참상사용siRNA Target Finder연건진행목적기흉적siRNA서렬대응DNA적설계여사선,선택설계량조대발협결구적핵감산서렬,극륭도공재체pSUPER.puro중,전화DH5α균주,제취질립,진행한제성내절매매절감정화측서분석,장중조적pSUPER.puro-PYGO2질립전염효질류C6세포48 h,검측기대해세포PYGO2단백적영향.결과 경매절감정사선출적중조체측서결과여목적서렬완전일치,중조재체현저강저효질류세포PYGO2적단백표체,중조재체구건성공.결론 이용RNAi기술가성공구건억제PYGO2표체적siRNA진핵표체재체.
