山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
31期
11-13
,共3页
唐莉娜%刘涛%黄雨婷%徐丽娜%卢丽丹
唐莉娜%劉濤%黃雨婷%徐麗娜%盧麗丹
당리나%류도%황우정%서려나%로려단
弓形虫微线体蛋白%真核表达质粒%PCDNA-MIC3表达
弓形蟲微線體蛋白%真覈錶達質粒%PCDNA-MIC3錶達
궁형충미선체단백%진핵표체질립%PCDNA-MIC3표체
目的 构建弓形虫微线体蛋白( MIC3)的真核表达质粒,为进一步研究MIC3蛋白的功能奠定基础.方法 PCR法扩增弓形虫MIC3目的基因,将纯化的目的基因插入到真核表达质粒PCDNA3.0,并转入DH5α 宿主菌中,在含有青霉素的SOB平板上筛选阳性重组子,采用酶切和PCR扩增法对重组质粒进行鉴定；应用HifectinⅡ真核细胞转染试剂将弓形虫PCDNA-MIC3真核表达质粒转染幼地鼠肾细胞(BHK),表达产物用SDS-PAGE进一步确认,ELISA法检测表达蛋白的免疫原性.结果 重组质粒PCDNA-MIC3经单双酶切及PCR扩增都得到以原插入片段MIC3基因1120 bp大小相同的片段,PCDNA-MIC3能在BHK细胞中高效表达,表达产物能被弓形虫特异性血清所识别.结论 成功构建了弓形虫MIC3基因真核表达质粒PCDNA-MIC3.
目的 構建弓形蟲微線體蛋白( MIC3)的真覈錶達質粒,為進一步研究MIC3蛋白的功能奠定基礎.方法 PCR法擴增弓形蟲MIC3目的基因,將純化的目的基因插入到真覈錶達質粒PCDNA3.0,併轉入DH5α 宿主菌中,在含有青黴素的SOB平闆上篩選暘性重組子,採用酶切和PCR擴增法對重組質粒進行鑒定；應用HifectinⅡ真覈細胞轉染試劑將弓形蟲PCDNA-MIC3真覈錶達質粒轉染幼地鼠腎細胞(BHK),錶達產物用SDS-PAGE進一步確認,ELISA法檢測錶達蛋白的免疫原性.結果 重組質粒PCDNA-MIC3經單雙酶切及PCR擴增都得到以原插入片段MIC3基因1120 bp大小相同的片段,PCDNA-MIC3能在BHK細胞中高效錶達,錶達產物能被弓形蟲特異性血清所識彆.結論 成功構建瞭弓形蟲MIC3基因真覈錶達質粒PCDNA-MIC3.
목적 구건궁형충미선체단백( MIC3)적진핵표체질립,위진일보연구MIC3단백적공능전정기출.방법 PCR법확증궁형충MIC3목적기인,장순화적목적기인삽입도진핵표체질립PCDNA3.0,병전입DH5α 숙주균중,재함유청매소적SOB평판상사선양성중조자,채용매절화PCR확증법대중조질립진행감정；응용HifectinⅡ진핵세포전염시제장궁형충PCDNA-MIC3진핵표체질립전염유지서신세포(BHK),표체산물용SDS-PAGE진일보학인,ELISA법검측표체단백적면역원성.결과 중조질립PCDNA-MIC3경단쌍매절급PCR확증도득도이원삽입편단MIC3기인1120 bp대소상동적편단,PCDNA-MIC3능재BHK세포중고효표체,표체산물능피궁형충특이성혈청소식별.결론 성공구건료궁형충MIC3기인진핵표체질립PCDNA-MIC3.
