实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2010年
19期
1503-1505
,共3页
陈海%王军%范亚珍%朱登纳%吴值荣%候艳艳
陳海%王軍%範亞珍%硃登納%吳值榮%候豔豔
진해%왕군%범아진%주등납%오치영%후염염
Nestin%脐血%神经干细胞%诱导分化%脑性瘫痪
Nestin%臍血%神經榦細胞%誘導分化%腦性癱瘓
Nestin%제혈%신경간세포%유도분화%뇌성탄탄
目的 探讨人脐血单个核细胞(UBC-MNCs)体外定向诱导分化为神经干细胞(NSCs)的可行性,观察NSCs中Nestin基因mRNA的表达情况.方法 采用密度梯度离心法从人脐血中分离出UBC-MNCs,用含人表皮细胞生长因子(hEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和B27因子的Neurobasal培养基联合诱导其向NSCs方向分化,观察NSCs增殖分化及形态学特点;免疫组织化学法检测培养细胞中神经细胞标志抗原巢蛋白Nestin、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况;RT·PCR法检测诱导前后培养细胞中Nestin mRNA的表达变化.结果 UBC-MNCs可定向诱导分化为神经元样细胞,形成典型NSCs克隆团,表达Nestin、NSE、GFAP标记抗原蛋白,诱导前细胞Nestin、NSE、GFAP的表达均非常低,诱导6 d时Nestin阳性细胞数达高峰,然后开始下降,NSE、GFAP阳性细胞数逐渐增高.Brdu标记靶细胞阳性率达90%.Nestin mRNA在诱导前细胞中低表达,诱导3 d、6 d、9 d、12 d时表达逐渐升高(P<0.05).结论 体外诱导培养叮获得UBC-MNCs源性NSCs,Nestin基因是NSCs增殖分化的关键调控因子,在UBC-MNCs诱导分化后表达明显增强.脐血能够成为NSCs的新来源.
目的 探討人臍血單箇覈細胞(UBC-MNCs)體外定嚮誘導分化為神經榦細胞(NSCs)的可行性,觀察NSCs中Nestin基因mRNA的錶達情況.方法 採用密度梯度離心法從人臍血中分離齣UBC-MNCs,用含人錶皮細胞生長因子(hEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和B27因子的Neurobasal培養基聯閤誘導其嚮NSCs方嚮分化,觀察NSCs增殖分化及形態學特點;免疫組織化學法檢測培養細胞中神經細胞標誌抗原巢蛋白Nestin、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、膠質纖維痠性蛋白(GFAP)的錶達情況;RT·PCR法檢測誘導前後培養細胞中Nestin mRNA的錶達變化.結果 UBC-MNCs可定嚮誘導分化為神經元樣細胞,形成典型NSCs剋隆糰,錶達Nestin、NSE、GFAP標記抗原蛋白,誘導前細胞Nestin、NSE、GFAP的錶達均非常低,誘導6 d時Nestin暘性細胞數達高峰,然後開始下降,NSE、GFAP暘性細胞數逐漸增高.Brdu標記靶細胞暘性率達90%.Nestin mRNA在誘導前細胞中低錶達,誘導3 d、6 d、9 d、12 d時錶達逐漸升高(P<0.05).結論 體外誘導培養叮穫得UBC-MNCs源性NSCs,Nestin基因是NSCs增殖分化的關鍵調控因子,在UBC-MNCs誘導分化後錶達明顯增彊.臍血能夠成為NSCs的新來源.
목적 탐토인제혈단개핵세포(UBC-MNCs)체외정향유도분화위신경간세포(NSCs)적가행성,관찰NSCs중Nestin기인mRNA적표체정황.방법 채용밀도제도리심법종인제혈중분리출UBC-MNCs,용함인표피세포생장인자(hEGF)、감성성섬유세포생장인자(bFGF)화B27인자적Neurobasal배양기연합유도기향NSCs방향분화,관찰NSCs증식분화급형태학특점;면역조직화학법검측배양세포중신경세포표지항원소단백Nestin、신경원특이성희순화매(NSE)、효질섬유산성단백(GFAP)적표체정황;RT·PCR법검측유도전후배양세포중Nestin mRNA적표체변화.결과 UBC-MNCs가정향유도분화위신경원양세포,형성전형NSCs극륭단,표체Nestin、NSE、GFAP표기항원단백,유도전세포Nestin、NSE、GFAP적표체균비상저,유도6 d시Nestin양성세포수체고봉,연후개시하강,NSE、GFAP양성세포수축점증고.Brdu표기파세포양성솔체90%.Nestin mRNA재유도전세포중저표체,유도3 d、6 d、9 d、12 d시표체축점승고(P<0.05).결론 체외유도배양정획득UBC-MNCs원성NSCs,Nestin기인시NSCs증식분화적관건조공인자,재UBC-MNCs유도분화후표체명현증강.제혈능구성위NSCs적신래원.
