实用医院临床杂志
實用醫院臨床雜誌
실용의원림상잡지
PRACTICAL JOURNAL OF CLINICAL MEDICINE
2004年
1期
26-29
,共4页
廖楚航%王大章%杨西川%李扬%房思炼
廖楚航%王大章%楊西川%李颺%房思煉
료초항%왕대장%양서천%리양%방사련
血管内皮生长因子%单链抗体%点突变
血管內皮生長因子%單鏈抗體%點突變
혈관내피생장인자%단련항체%점돌변
目的:回复基因克隆过程中的异常点突变,重新表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)单链抗体基因(V11),恢复其抗原结合能力.方法:通过逆转录及多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增抗人VEGF单克隆抗体(E11)的可变区基因片段,构建表达载体pET-15b(含E-tag).将V11轻、重链可变区基因序列(V11L、V11H)与其所属亚组共同序列和一致序列进行联配比较,发现异常氨基酸并分析其性质,确定异常突变点.PCR定点回复突变,重新表达单链抗体基因(V11m), ELISA检测表达产物与VEGF165的结合.结果:V11存在四个异常突变点:V11L第7、23、36位,V11H第113位.回复突变后的表达产物与VEGF165的结合能力显著提高.结论:利用抗体残基位置序列保守性及氨基酸侧链性质分析,可以推定并有助于回复异常点突变,该方法简便易行.获得的抗人VEGF单链抗体对恶性肿瘤的诊治具有潜在的应用价值.
目的:迴複基因剋隆過程中的異常點突變,重新錶達抗人血管內皮生長因子(VEGF)單鏈抗體基因(V11),恢複其抗原結閤能力.方法:通過逆轉錄及多聚酶鏈式反應(RT-PCR),擴增抗人VEGF單剋隆抗體(E11)的可變區基因片段,構建錶達載體pET-15b(含E-tag).將V11輕、重鏈可變區基因序列(V11L、V11H)與其所屬亞組共同序列和一緻序列進行聯配比較,髮現異常氨基痠併分析其性質,確定異常突變點.PCR定點迴複突變,重新錶達單鏈抗體基因(V11m), ELISA檢測錶達產物與VEGF165的結閤.結果:V11存在四箇異常突變點:V11L第7、23、36位,V11H第113位.迴複突變後的錶達產物與VEGF165的結閤能力顯著提高.結論:利用抗體殘基位置序列保守性及氨基痠側鏈性質分析,可以推定併有助于迴複異常點突變,該方法簡便易行.穫得的抗人VEGF單鏈抗體對噁性腫瘤的診治具有潛在的應用價值.
목적:회복기인극륭과정중적이상점돌변,중신표체항인혈관내피생장인자(VEGF)단련항체기인(V11),회복기항원결합능력.방법:통과역전록급다취매련식반응(RT-PCR),확증항인VEGF단극륭항체(E11)적가변구기인편단,구건표체재체pET-15b(함E-tag).장V11경、중련가변구기인서렬(V11L、V11H)여기소속아조공동서렬화일치서렬진행련배비교,발현이상안기산병분석기성질,학정이상돌변점.PCR정점회복돌변,중신표체단련항체기인(V11m), ELISA검측표체산물여VEGF165적결합.결과:V11존재사개이상돌변점:V11L제7、23、36위,V11H제113위.회복돌변후적표체산물여VEGF165적결합능력현저제고.결론:이용항체잔기위치서렬보수성급안기산측련성질분석,가이추정병유조우회복이상점돌변,해방법간편역행.획득적항인VEGF단련항체대악성종류적진치구유잠재적응용개치.
