细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2006年
2期
206-212
,共7页
吴开胤%王伟铭%黄秋花%周同%陈楠
吳開胤%王偉銘%黃鞦花%週同%陳楠
오개윤%왕위명%황추화%주동%진남
RNA干扰%血小板反应蛋白1%转化生长因子-β1%肾小管上皮细胞%肾纤维化
RNA榦擾%血小闆反應蛋白1%轉化生長因子-β1%腎小管上皮細胞%腎纖維化
RNA간우%혈소판반응단백1%전화생장인자-β1%신소관상피세포%신섬유화
血小板反应蛋白1(TSP1)是转化生长因子-β1(TGF-β1)体内重要的活化因子,而后者又是致肾小管间质纤维化的关键因素.观察了针对TSP1的小双链干扰RNA(siRNA-TSP1),抑制由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1过度活化.将根据人TSP1基因序列设计的特异siRNA-TSP1转染人肾小管上皮细胞系(HK-2),利用Western印迹、RT-PCR、流式细胞仪及ELISA等方法,检测了TSP1、TGF-β1及其信号蛋白Smad2与p-Smad2、纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)的基因转录水平、蛋白质表达或蛋白质活性.结果显示,siRNA-TSP1能有效转染HK-2细胞,并以剂量依赖方式显著抑制TSP1的基因转录与合成;其对TGF-β1的合成影响较小,但能明显抑制TGF-β1的活化.此外siRNA-TSP1可阻抑TGF-β1依赖的Smad2磷酸化,减少细胞外基质FN以及PAI-1的合成.研究结果提示,由于TSP1是TGF-β1重要的内源性活化因子,故针对TSP1的RNA干扰能在体外有效抑制TSP1表达并相应调抑了TGF-β1的活化.
血小闆反應蛋白1(TSP1)是轉化生長因子-β1(TGF-β1)體內重要的活化因子,而後者又是緻腎小管間質纖維化的關鍵因素.觀察瞭針對TSP1的小雙鏈榦擾RNA(siRNA-TSP1),抑製由血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導的腎小管上皮細胞TGF-β1過度活化.將根據人TSP1基因序列設計的特異siRNA-TSP1轉染人腎小管上皮細胞繫(HK-2),利用Western印跡、RT-PCR、流式細胞儀及ELISA等方法,檢測瞭TSP1、TGF-β1及其信號蛋白Smad2與p-Smad2、纖維連接蛋白(FN)和纖溶酶原激活劑抑製物-1(PAI-1)的基因轉錄水平、蛋白質錶達或蛋白質活性.結果顯示,siRNA-TSP1能有效轉染HK-2細胞,併以劑量依賴方式顯著抑製TSP1的基因轉錄與閤成;其對TGF-β1的閤成影響較小,但能明顯抑製TGF-β1的活化.此外siRNA-TSP1可阻抑TGF-β1依賴的Smad2燐痠化,減少細胞外基質FN以及PAI-1的閤成.研究結果提示,由于TSP1是TGF-β1重要的內源性活化因子,故針對TSP1的RNA榦擾能在體外有效抑製TSP1錶達併相應調抑瞭TGF-β1的活化.
혈소판반응단백1(TSP1)시전화생장인자-β1(TGF-β1)체내중요적활화인자,이후자우시치신소관간질섬유화적관건인소.관찰료침대TSP1적소쌍련간우RNA(siRNA-TSP1),억제유혈관긴장소Ⅱ(AngⅡ)유도적신소관상피세포TGF-β1과도활화.장근거인TSP1기인서렬설계적특이siRNA-TSP1전염인신소관상피세포계(HK-2),이용Western인적、RT-PCR、류식세포의급ELISA등방법,검측료TSP1、TGF-β1급기신호단백Smad2여p-Smad2、섬유련접단백(FN)화섬용매원격활제억제물-1(PAI-1)적기인전록수평、단백질표체혹단백질활성.결과현시,siRNA-TSP1능유효전염HK-2세포,병이제량의뢰방식현저억제TSP1적기인전록여합성;기대TGF-β1적합성영향교소,단능명현억제TGF-β1적활화.차외siRNA-TSP1가조억TGF-β1의뢰적Smad2린산화,감소세포외기질FN이급PAI-1적합성.연구결과제시,유우TSP1시TGF-β1중요적내원성활화인자,고침대TSP1적RNA간우능재체외유효억제TSP1표체병상응조억료TGF-β1적활화.
