CAJ | 학술논문

目的:应用免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞,观察其分选效果,建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(hMAPCs)的方法.方法:取健康成人志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,在自制培养基下贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,锥虫蓝拒染实验计数MACS分选前后细胞活力.流式细胞仪鉴定分选后细胞纯度;流式细胞仪分析培养细胞CD29、CD44、CD34和HLA-DR表达情况.结果:通过MACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5～10)×104/ml hMAPCs,分选后的hMAPCs细胞生长良好,最长传代到第20代.分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;流式细胞仪分析获取的CD45-、GlyA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪检测hMAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99.2%,CD44阳性细胞比率为98.3%,CD34阳性细胞比率为1.2%,HLA-DR阳性细胞比率为5.3%.结论:CD45、GlyA免疫微磁珠负分选可从骨髓中分离高纯度的hMAPCs;分选后hMAPCs在自行研制的培养基中有较强的增殖能力.
목적:응용면역자주법분선인골수다능성체조세포,관찰기분선효과,건입체외분선순화급배양인골수래원다능성체조세포(hMAPCs)적방법.방법:취건강성인지원자괄량골수후채용제도밀도리심법분리획취단개핵세포,재자제배양기하첩벽배양후,장획취적골수첩벽세포통과CD45、혈당단백A(GlyA)면역미자주(miniMACS)부분선,추충람거염실험계수MACS분선전후세포활력.류식세포의감정분선후세포순도;류식세포의분석배양세포CD29、CD44、CD34화HLA-DR표체정황.결과:통과MACS분선,평균매1×106/ml골수첩벽세포가분선출약(5～10)×104/ml hMAPCs,분선후적hMAPCs세포생장량호,최장전대도제20대.분선전후세포활력분별위(96.7±1.7)%화(96.0±2.4)%,무명현차이;류식세포의분석획취적CD45-、GlyA-세포순도대우98%;류식세포의검측hMAPCs중CD29양성표체세포비솔위99.2%,CD44양성세포비솔위98.3%,CD34양성세포비솔위1.2%,HLA-DR양성세포비솔위5.3%.결론:CD45、GlyA면역미자주부분선가종골수중분리고순도적hMAPCs;분선후hMAPCs재자행연제적배양기중유교강적증식능력.