中国当代儿科杂志
中國噹代兒科雜誌
중국당대인과잡지
CHINA JOURNAL OF CONTEMPORARY PEDIATRICS
2007年
1期
47-50
,共4页
冯晨%唐锁勤%王建文%刘立真%高晓宁%龙卉
馮晨%唐鎖勤%王建文%劉立真%高曉寧%龍卉
풍신%당쇄근%왕건문%류립진%고효저%룡훼
神经母细胞瘤%MYCN%荧光定量RT-PCR%绿色荧光染料Ⅰ
神經母細胞瘤%MYCN%熒光定量RT-PCR%綠色熒光染料Ⅰ
신경모세포류%MYCN%형광정량RT-PCR%록색형광염료Ⅰ
目的 MYCN基因表达对神经母细胞瘤的治疗及预后评估有指导意义,目前国内对于MYCN基因mRNA的定量检测未见报道,该研究拟采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ(SYBR GREEN Ⅰ)实时检测的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞MYCN基因mRNA的表达,并对其可行性及实用性进行研究,力争探索出微量瘤标本的MYCN基因mRNA定量检测的可行方法.方法 提取神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞总RNA,采用SYBR GREEN Ⅰ实时检测的RT-PCR检测其MYCN基因mRNA的表达,并用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,将MYCN基因的mRNA拷贝数与GAPDH的拷贝数相除,结果为单细胞MYCN基因mRNA的表达水平.结果 反应标准曲线有良好的相关性(R2＞0.99),PCR产物特异,神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达水平为17.4±1.2.结论 只要严格控制PCR反应条件,SYBR GREEN Ⅰ定量RT-PCR法可以作为一种良好的定量PCR方法对神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达进行检测,此方法为临床微量神经母细胞瘤瘤组织的MYCN基因mRNA的定量检测提供了可能.
目的 MYCN基因錶達對神經母細胞瘤的治療及預後評估有指導意義,目前國內對于MYCN基因mRNA的定量檢測未見報道,該研究擬採用SYBR綠色熒光染料Ⅰ(SYBR GREEN Ⅰ)實時檢測的逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)方法,檢測神經母細胞瘤細胞繫LA-N-5細胞MYCN基因mRNA的錶達,併對其可行性及實用性進行研究,力爭探索齣微量瘤標本的MYCN基因mRNA定量檢測的可行方法.方法 提取神經母細胞瘤細胞繫LA-N-5細胞總RNA,採用SYBR GREEN Ⅰ實時檢測的RT-PCR檢測其MYCN基因mRNA的錶達,併用3-燐痠甘油醛脫氫酶(GAPDH)作為內參照,將MYCN基因的mRNA拷貝數與GAPDH的拷貝數相除,結果為單細胞MYCN基因mRNA的錶達水平.結果 反應標準麯線有良好的相關性(R2＞0.99),PCR產物特異,神經母細胞瘤細胞繫LA-N-5 MYCN基因mRNA的錶達水平為17.4±1.2.結論 隻要嚴格控製PCR反應條件,SYBR GREEN Ⅰ定量RT-PCR法可以作為一種良好的定量PCR方法對神經母細胞瘤細胞繫LA-N-5 MYCN基因mRNA的錶達進行檢測,此方法為臨床微量神經母細胞瘤瘤組織的MYCN基因mRNA的定量檢測提供瞭可能.
목적 MYCN기인표체대신경모세포류적치료급예후평고유지도의의,목전국내대우MYCN기인mRNA적정량검측미견보도,해연구의채용SYBR록색형광염료Ⅰ(SYBR GREEN Ⅰ)실시검측적역전록-취합매련반응(RT-PCR)방법,검측신경모세포류세포계LA-N-5세포MYCN기인mRNA적표체,병대기가행성급실용성진행연구,력쟁탐색출미량류표본적MYCN기인mRNA정량검측적가행방법.방법 제취신경모세포류세포계LA-N-5세포총RNA,채용SYBR GREEN Ⅰ실시검측적RT-PCR검측기MYCN기인mRNA적표체,병용3-린산감유철탈경매(GAPDH)작위내삼조,장MYCN기인적mRNA고패수여GAPDH적고패수상제,결과위단세포MYCN기인mRNA적표체수평.결과 반응표준곡선유량호적상관성(R2＞0.99),PCR산물특이,신경모세포류세포계LA-N-5 MYCN기인mRNA적표체수평위17.4±1.2.결론 지요엄격공제PCR반응조건,SYBR GREEN Ⅰ정량RT-PCR법가이작위일충량호적정량PCR방법대신경모세포류세포계LA-N-5 MYCN기인mRNA적표체진행검측,차방법위림상미량신경모세포류류조직적MYCN기인mRNA적정량검측제공료가능.
