遵义医学院学报
遵義醫學院學報
준의의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI
2007年
4期
452-455
,共4页
黄俊琼%余妍%杜联锋%宋明英%肖美艳%孙万邦
黃俊瓊%餘妍%杜聯鋒%宋明英%肖美豔%孫萬邦
황준경%여연%두련봉%송명영%초미염%손만방
人IL-31%表达%E.coli%趋化因子
人IL-31%錶達%E.coli%趨化因子
인IL-31%표체%E.coli%추화인자
目的 构建人IL-31原核表达载体,在大肠杆菌中表达,研究人IL-31对人表皮角化细胞分泌趋化因子MIP-3β的活性影响.方法 大量培养pET28a(+)-hIL-31工程菌株,提取质粒,BamHI、HindⅢ双酶切,并将其连接到原核表达载体pET32a(+),通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达.用RT-PCR检测该目的蛋白对人表皮角化细胞HaCaT表达趋化因子MIP-3β的影响.结果 原核表达质粒pET32a(+)-hIL-31构建正确,经双酶切、PCR和序列测定鉴定,序列正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达,纯化后的目的蛋白可刺激人表皮角化细胞表达MIP-3β.结论 原核表达质粒pET32a(+)-hIL-31构建正确,纯化后的蛋白具有生物学活性,可刺激人表皮角化细胞表达趋化因子MIP-3β,为研究人IL-31的作用及其作用机制和制备单克隆抗体奠定了基础.
目的 構建人IL-31原覈錶達載體,在大腸桿菌中錶達,研究人IL-31對人錶皮角化細胞分泌趨化因子MIP-3β的活性影響.方法 大量培養pET28a(+)-hIL-31工程菌株,提取質粒,BamHI、HindⅢ雙酶切,併將其連接到原覈錶達載體pET32a(+),通過IPTG誘導目的基因在大腸桿菌中錶達.用RT-PCR檢測該目的蛋白對人錶皮角化細胞HaCaT錶達趨化因子MIP-3β的影響.結果 原覈錶達質粒pET32a(+)-hIL-31構建正確,經雙酶切、PCR和序列測定鑒定,序列正確,IPTG誘導目的基因在大腸桿菌中大量錶達,純化後的目的蛋白可刺激人錶皮角化細胞錶達MIP-3β.結論 原覈錶達質粒pET32a(+)-hIL-31構建正確,純化後的蛋白具有生物學活性,可刺激人錶皮角化細胞錶達趨化因子MIP-3β,為研究人IL-31的作用及其作用機製和製備單剋隆抗體奠定瞭基礎.
목적 구건인IL-31원핵표체재체,재대장간균중표체,연구인IL-31대인표피각화세포분비추화인자MIP-3β적활성영향.방법 대량배양pET28a(+)-hIL-31공정균주,제취질립,BamHI、HindⅢ쌍매절,병장기련접도원핵표체재체pET32a(+),통과IPTG유도목적기인재대장간균중표체.용RT-PCR검측해목적단백대인표피각화세포HaCaT표체추화인자MIP-3β적영향.결과 원핵표체질립pET32a(+)-hIL-31구건정학,경쌍매절、PCR화서렬측정감정,서렬정학,IPTG유도목적기인재대장간균중대량표체,순화후적목적단백가자격인표피각화세포표체MIP-3β.결론 원핵표체질립pET32a(+)-hIL-31구건정학,순화후적단백구유생물학활성,가자격인표피각화세포표체추화인자MIP-3β,위연구인IL-31적작용급기작용궤제화제비단극륭항체전정료기출.
