新疆农业大学学报
新疆農業大學學報
신강농업대학학보
JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2009年
1期
1-4
,共4页
孙其喆%马素贞%简子健%苗中秋%王晓萍
孫其喆%馬素貞%簡子健%苗中鞦%王曉萍
손기철%마소정%간자건%묘중추%왕효평
牛双芽巴贝斯虫%HSP20基因%热休克蛋白%原核表达
牛雙芽巴貝斯蟲%HSP20基因%熱休剋蛋白%原覈錶達
우쌍아파패사충%HSP20기인%열휴극단백%원핵표체
从患牛焦虫病的牛全血样品中抽提总RNA,通过设计特异性引物,经RT-PCR扩增牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白20(HSP20)基因的外显子,将其插入pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体PGEX-4T-2-HSP20(exon).试验结果显示牛双芽巴贝斯虫HSP20基因外显子已被成功克隆.该基因的外显子序列与国际标准株HSP20外显子的序列存在两个碱基的突变,导致其编码的蛋白质出现了一个氨基酸的变异.测序结果还表明,克隆出的牛双芽巴贝斯虫HSP20基因外显子已正向插入原核质粒表达载体PGEX-4T-2,成功构建了PGEX-4T-2-HSP20(exon)表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中的得到表达.
從患牛焦蟲病的牛全血樣品中抽提總RNA,通過設計特異性引物,經RT-PCR擴增牛雙芽巴貝斯蟲熱休剋蛋白20(HSP20)基因的外顯子,將其插入pMD18-T載體進行測序、鑒定,構建原覈錶達質粒載體PGEX-4T-2-HSP20(exon).試驗結果顯示牛雙芽巴貝斯蟲HSP20基因外顯子已被成功剋隆.該基因的外顯子序列與國際標準株HSP20外顯子的序列存在兩箇堿基的突變,導緻其編碼的蛋白質齣現瞭一箇氨基痠的變異.測序結果還錶明,剋隆齣的牛雙芽巴貝斯蟲HSP20基因外顯子已正嚮插入原覈質粒錶達載體PGEX-4T-2,成功構建瞭PGEX-4T-2-HSP20(exon)錶達載體,併在大腸桿菌BL21(DE3)中的得到錶達.
종환우초충병적우전혈양품중추제총RNA,통과설계특이성인물,경RT-PCR확증우쌍아파패사충열휴극단백20(HSP20)기인적외현자,장기삽입pMD18-T재체진행측서、감정,구건원핵표체질립재체PGEX-4T-2-HSP20(exon).시험결과현시우쌍아파패사충HSP20기인외현자이피성공극륭.해기인적외현자서렬여국제표준주HSP20외현자적서렬존재량개감기적돌변,도치기편마적단백질출현료일개안기산적변이.측서결과환표명,극륭출적우쌍아파패사충HSP20기인외현자이정향삽입원핵질립표체재체PGEX-4T-2,성공구건료PGEX-4T-2-HSP20(exon)표체재체,병재대장간균BL21(DE3)중적득도표체.
