动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2010年
6期
15-19
,共5页
王青%胡建和%徐彦召%朱国坡%宋涛%李任峰
王青%鬍建和%徐彥召%硃國坡%宋濤%李任峰
왕청%호건화%서언소%주국파%송도%리임봉
腺病毒载体%AIV H5N1亚型%NA基因%载体构建
腺病毒載體%AIV H5N1亞型%NA基因%載體構建
선병독재체%AIV H5N1아형%NA기인%재체구건
构建携带有H5Nl亚型AIV NA基因的重组腺病毒表达载体,为进一步研究AIV中NA基因在病毒致病过程中的作用及相关诊断试剂的开发提供依据.采用PCR的方法从构建好的包含有H5N1AIV NA基因的pMD-19T-N1质粒中扩增出NA基因,定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中,含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-N1与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-N1,将pAdeasyal-N1经pac Ⅰ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有NA基因的腺病毒pAd-N1.结果表明,构建含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-N1和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-N1经PCR、双酶切及核苷酸测序测定无误.线性化后的pAdeasy-N1转染HEK293细胞,成功获得腺病毒pAd-N1载体,经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达.
構建攜帶有H5Nl亞型AIV NA基因的重組腺病毒錶達載體,為進一步研究AIV中NA基因在病毒緻病過程中的作用及相關診斷試劑的開髮提供依據.採用PCR的方法從構建好的包含有H5N1AIV NA基因的pMD-19T-N1質粒中擴增齣NA基因,定嚮插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭質粒中,含有目的基因的腺病毒穿梭質粒pAdtrack-N1與腺病毒骨架質粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中進行同源重組,穫得腺病毒質粒pAdeasy-N1,將pAdeasyal-N1經pac Ⅰ線性化後轉染HEK293細胞株,包裝齣含有NA基因的腺病毒pAd-N1.結果錶明,構建含有目的基因的腺病毒穿梭質粒pAdtrack-N1和含有目的基因的腺病毒質粒pAdeasy-N1經PCR、雙酶切及覈苷痠測序測定無誤.線性化後的pAdeasy-N1轉染HEK293細胞,成功穫得腺病毒pAd-N1載體,經綠色熒光蛋白和RT-PCR分析證實,目的基因在該細胞中成功錶達.
구건휴대유H5Nl아형AIV NA기인적중조선병독표체재체,위진일보연구AIV중NA기인재병독치병과정중적작용급상관진단시제적개발제공의거.채용PCR적방법종구건호적포함유H5N1AIV NA기인적pMD-19T-N1질립중확증출NA기인,정향삽입pAdtrack-CMV선병독천사질립중,함유목적기인적선병독천사질립pAdtrack-N1여선병독골가질립pAdeasy-1재기인공정균BJ5183중진행동원중조,획득선병독질립pAdeasy-N1,장pAdeasyal-N1경pac Ⅰ선성화후전염HEK293세포주,포장출함유NA기인적선병독pAd-N1.결과표명,구건함유목적기인적선병독천사질립pAdtrack-N1화함유목적기인적선병독질립pAdeasy-N1경PCR、쌍매절급핵감산측서측정무오.선성화후적pAdeasy-N1전염HEK293세포,성공획득선병독pAd-N1재체,경록색형광단백화RT-PCR분석증실,목적기인재해세포중성공표체.
