南昌大学学报（医学版）
南昌大學學報（醫學版）
남창대학학보（의학판）
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE JIANGXI
2010年
11期
6-11,封3
,共7页
目的 观察不同保存方法对羊膜生物学性能的影响.方法 取10例健康剖宫产产妇胎盘,剥离羊膜,将羊膜平铺于无菌滤纸片上,上皮面朝上,剪成20 mm×20 mm小块,随机分为3组,分别采用Hank's平衡盐/甘油溶液深低温(-80 ℃)保存、纯甘油4 ℃保存、冷冻干燥常温保存.分别于保存3、6、12个月取羊膜进行HE染色光镜观察、胶原蛋白酶Ⅳ降解速度测定和细胞因子含量放射免疫测定,并与新鲜羊膜进行对照.结果 ①新鲜羊膜及3种方法保存的羊膜均可见到羊膜的5层组织结构,自内向外依次为上皮细胞层、基底膜、致密层、纤维母细胞层、海绵层.新鲜羊膜的上皮细胞形态完好、排列较整齐紧密,其下可见厚而连续的基底膜,致密层、纤维母细胞层、海绵层结构紧密.冷冻干燥常温保存3个月,羊膜组织形态特征与新鲜羊膜基本相似,上皮细胞结构完整、排列紧密,连续的基底膜、致密层、纤维母细胞层、海绵层清晰可见;保存6个月,上皮细胞形态基本完好、排列整齐,但基底膜略显模糊,纤维母细胞层、海绵层相对疏松;保存12个月,上皮细胞形态基本完好但核上移,基底膜模糊,纤维母细胞层、海绵层疏松变薄,其内出现空泡.Hank's平衡盐/甘油溶液深低温保存3个月,羊膜上皮细胞形态基本完好,基底膜略显模糊,致密层、纤维母细胞层、海绵层相对疏松;保存6个月,上皮细胞结构基本完整,连续排列但细胞间隙较为模糊,基底膜更显模糊,致密层、纤维母细胞层、海绵层进一步疏松;保存12个月,上皮细胞皱缩,上皮层连续性中断,基底膜及致密层基本完整,但各层结构模糊不清.纯甘油4 ℃保存3个月,羊膜上皮细胞皱缩,细胞间隙加大,基底膜及致密层基本完整,各层结构依稀可见;保存6个月,部分上皮细胞破裂,基底膜完整,致密层、纤维母细胞层、海绵层疏松;保存12个月,羊膜上皮细胞部分脱落,基质层厚度变薄,基底膜、致密层模糊不清,部分纤维母细胞层和海绵层缺失.②与新鲜羊膜相比,保存羊膜在胶原酶Ⅳ溶液中降解速度均有所加快.其中纯甘油4 ℃保存羊膜降解速度最快,冷冻干燥保存羊膜降解速度最慢.③冷冻干燥保存羊膜中被检测的8种细胞因子残存量均超过40%;Hank's平衡盐/甘油溶液深低温保存和纯甘油4 ℃保存羊膜中8种细胞因子残存量均低于20%,明显低于冷冻干燥保存之羊膜细胞因子存留量(P＜0.05).结论 3种方法中以冷冻干燥常温法保存羊膜效果最好,纯甘油4 ℃保存方法效果最差.冷冻干燥常温羊膜保存时限以不超过1年、Hank's平衡盐/甘油溶液深低温保存不超过6个月、纯甘油4 ℃保存不超过3个月为宜.
目的 觀察不同保存方法對羊膜生物學性能的影響.方法 取10例健康剖宮產產婦胎盤,剝離羊膜,將羊膜平鋪于無菌濾紙片上,上皮麵朝上,剪成20 mm×20 mm小塊,隨機分為3組,分彆採用Hank's平衡鹽/甘油溶液深低溫(-80 ℃)保存、純甘油4 ℃保存、冷凍榦燥常溫保存.分彆于保存3、6、12箇月取羊膜進行HE染色光鏡觀察、膠原蛋白酶Ⅳ降解速度測定和細胞因子含量放射免疫測定,併與新鮮羊膜進行對照.結果 ①新鮮羊膜及3種方法保存的羊膜均可見到羊膜的5層組織結構,自內嚮外依次為上皮細胞層、基底膜、緻密層、纖維母細胞層、海綿層.新鮮羊膜的上皮細胞形態完好、排列較整齊緊密,其下可見厚而連續的基底膜,緻密層、纖維母細胞層、海綿層結構緊密.冷凍榦燥常溫保存3箇月,羊膜組織形態特徵與新鮮羊膜基本相似,上皮細胞結構完整、排列緊密,連續的基底膜、緻密層、纖維母細胞層、海綿層清晰可見;保存6箇月,上皮細胞形態基本完好、排列整齊,但基底膜略顯模糊,纖維母細胞層、海綿層相對疏鬆;保存12箇月,上皮細胞形態基本完好但覈上移,基底膜模糊,纖維母細胞層、海綿層疏鬆變薄,其內齣現空泡.Hank's平衡鹽/甘油溶液深低溫保存3箇月,羊膜上皮細胞形態基本完好,基底膜略顯模糊,緻密層、纖維母細胞層、海綿層相對疏鬆;保存6箇月,上皮細胞結構基本完整,連續排列但細胞間隙較為模糊,基底膜更顯模糊,緻密層、纖維母細胞層、海綿層進一步疏鬆;保存12箇月,上皮細胞皺縮,上皮層連續性中斷,基底膜及緻密層基本完整,但各層結構模糊不清.純甘油4 ℃保存3箇月,羊膜上皮細胞皺縮,細胞間隙加大,基底膜及緻密層基本完整,各層結構依稀可見;保存6箇月,部分上皮細胞破裂,基底膜完整,緻密層、纖維母細胞層、海綿層疏鬆;保存12箇月,羊膜上皮細胞部分脫落,基質層厚度變薄,基底膜、緻密層模糊不清,部分纖維母細胞層和海綿層缺失.②與新鮮羊膜相比,保存羊膜在膠原酶Ⅳ溶液中降解速度均有所加快.其中純甘油4 ℃保存羊膜降解速度最快,冷凍榦燥保存羊膜降解速度最慢.③冷凍榦燥保存羊膜中被檢測的8種細胞因子殘存量均超過40%;Hank's平衡鹽/甘油溶液深低溫保存和純甘油4 ℃保存羊膜中8種細胞因子殘存量均低于20%,明顯低于冷凍榦燥保存之羊膜細胞因子存留量(P＜0.05).結論 3種方法中以冷凍榦燥常溫法保存羊膜效果最好,純甘油4 ℃保存方法效果最差.冷凍榦燥常溫羊膜保存時限以不超過1年、Hank's平衡鹽/甘油溶液深低溫保存不超過6箇月、純甘油4 ℃保存不超過3箇月為宜.
목적 관찰불동보존방법대양막생물학성능적영향.방법 취10례건강부궁산산부태반,박리양막,장양막평포우무균려지편상,상피면조상,전성20 mm×20 mm소괴,수궤분위3조,분별채용Hank's평형염/감유용액심저온(-80 ℃)보존、순감유4 ℃보존、냉동간조상온보존.분별우보존3、6、12개월취양막진행HE염색광경관찰、효원단백매Ⅳ강해속도측정화세포인자함량방사면역측정,병여신선양막진행대조.결과 ①신선양막급3충방법보존적양막균가견도양막적5층조직결구,자내향외의차위상피세포층、기저막、치밀층、섬유모세포층、해면층.신선양막적상피세포형태완호、배렬교정제긴밀,기하가견후이련속적기저막,치밀층、섬유모세포층、해면층결구긴밀.냉동간조상온보존3개월,양막조직형태특정여신선양막기본상사,상피세포결구완정、배렬긴밀,련속적기저막、치밀층、섬유모세포층、해면층청석가견;보존6개월,상피세포형태기본완호、배렬정제,단기저막략현모호,섬유모세포층、해면층상대소송;보존12개월,상피세포형태기본완호단핵상이,기저막모호,섬유모세포층、해면층소송변박,기내출현공포.Hank's평형염/감유용액심저온보존3개월,양막상피세포형태기본완호,기저막략현모호,치밀층、섬유모세포층、해면층상대소송;보존6개월,상피세포결구기본완정,련속배렬단세포간극교위모호,기저막경현모호,치밀층、섬유모세포층、해면층진일보소송;보존12개월,상피세포추축,상피층련속성중단,기저막급치밀층기본완정,단각층결구모호불청.순감유4 ℃보존3개월,양막상피세포추축,세포간극가대,기저막급치밀층기본완정,각층결구의희가견;보존6개월,부분상피세포파렬,기저막완정,치밀층、섬유모세포층、해면층소송;보존12개월,양막상피세포부분탈락,기질층후도변박,기저막、치밀층모호불청,부분섬유모세포층화해면층결실.②여신선양막상비,보존양막재효원매Ⅳ용액중강해속도균유소가쾌.기중순감유4 ℃보존양막강해속도최쾌,냉동간조보존양막강해속도최만.③냉동간조보존양막중피검측적8충세포인자잔존량균초과40%;Hank's평형염/감유용액심저온보존화순감유4 ℃보존양막중8충세포인자잔존량균저우20%,명현저우냉동간조보존지양막세포인자존류량(P＜0.05).결론 3충방법중이냉동간조상온법보존양막효과최호,순감유4 ℃보존방법효과최차.냉동간조상온양막보존시한이불초과1년、Hank's평형염/감유용액심저온보존불초과6개월、순감유4 ℃보존불초과3개월위의.
