中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2005年
6期
614-616
,共3页
杨连玉%杨文艳%赵颖彩%钱剑%王哲
楊連玉%楊文豔%趙穎綵%錢劍%王哲
양련옥%양문염%조영채%전검%왕철
Ghrelin%基因克隆%原核表达%猪
Ghrelin%基因剋隆%原覈錶達%豬
Ghrelin%기인극륭%원핵표체%저
从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA,根据已发表的猪的Ghrelin mRNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了282 bp的片段.将该片段克隆于pMD-18T载体后进行序列分析,确认PCR产物为Ghrelin cDNA.从阳性克隆中提取质粒,经Nhe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,回收282 bp的目的片段,定向克隆到pET-28a表达载体中,提取质粒并再次转化到BL21(DE3)中,成功地筛选出阳性克隆.经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出猪Ghrelin基因的表达.
從豬下丘腦、胃等組織中提取總RNA,根據已髮錶的豬的Ghrelin mRNA序列設計閤成引物,通過RT-PCR進行cDNA擴增,穫得瞭282 bp的片段.將該片段剋隆于pMD-18T載體後進行序列分析,確認PCR產物為Ghrelin cDNA.從暘性剋隆中提取質粒,經Nhe Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切,迴收282 bp的目的片段,定嚮剋隆到pET-28a錶達載體中,提取質粒併再次轉化到BL21(DE3)中,成功地篩選齣暘性剋隆.經IPTG誘導暘性菌,通過SDS-PAGE檢測齣豬Ghrelin基因的錶達.
종저하구뇌、위등조직중제취총RNA,근거이발표적저적Ghrelin mRNA서렬설계합성인물,통과RT-PCR진행cDNA확증,획득료282 bp적편단.장해편단극륭우pMD-18T재체후진행서렬분석,학인PCR산물위Ghrelin cDNA.종양성극륭중제취질립,경Nhe Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절,회수282 bp적목적편단,정향극륭도pET-28a표체재체중,제취질립병재차전화도BL21(DE3)중,성공지사선출양성극륭.경IPTG유도양성균,통과SDS-PAGE검측출저Ghrelin기인적표체.
