中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
14期
2702-2704
,共3页
俞莉敏%党耕町%杨吉成%郑祖根
俞莉敏%黨耕町%楊吉成%鄭祖根
유리민%당경정%양길성%정조근
人骨形态发生蛋白%基因克隆%巢式RT-PCR
人骨形態髮生蛋白%基因剋隆%巢式RT-PCR
인골형태발생단백%기인극륭%소식RT-PCR
目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统.方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成.提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1 188 bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以HindⅢ和XbaⅠ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统.结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1 188 bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符.将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统.结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础.
目的:利用巢式逆轉錄-聚閤酶鏈反應擴增的方法,從肌肉組織中擴增人骨形成蛋白2全長cDNA併構建真覈錶達載體繫統.方法:實驗于2003-10/2005-10在囌州大學基因工程教研室和北京大學第三醫院骨科實驗室完成.提取成人肌肉組織內的總RNA,設計內外兩對引物以巢式逆轉錄-聚閤酶鏈反應擴增方法分兩次擴增齣人骨形成蛋白2全長1 188 bp基因,經T-A剋隆裝入pUCM-T質粒載體內,測序驗證後,將剋隆質粒以HindⅢ和XbaⅠ雙酶切後與pcDNA3.0載體相連接,構建真覈錶達載體繫統.結果:利用巢式逆轉錄-聚閤酶鏈反應擴增方法能從成人肌肉組織內擴增齣1 188 bp的人骨形成蛋白2全長cDNA基因,其測序結果顯示與Genebank報道序列完全相符.將擴增序列雙酶切後與pcDNA3.0載體相連接,經電泳驗證,能構建人骨形成蛋白2全長基因的真覈錶達繫統.結論:巢式逆轉錄-聚閤酶鏈反應擴增方法能從成人肌肉組織內擴增齣人骨形成蛋白2全長cDNA基因,併剋隆構建真覈錶達載體繫統,為下一步基因組織工程人工骨實驗奠定基礎.
목적:이용소식역전록-취합매련반응확증적방법,종기육조직중확증인골형성단백2전장cDNA병구건진핵표체재체계통.방법:실험우2003-10/2005-10재소주대학기인공정교연실화북경대학제삼의원골과실험실완성.제취성인기육조직내적총RNA,설계내외량대인물이소식역전록-취합매련반응확증방법분량차확증출인골형성단백2전장1 188 bp기인,경T-A극륭장입pUCM-T질립재체내,측서험증후,장극륭질립이HindⅢ화XbaⅠ쌍매절후여pcDNA3.0재체상련접,구건진핵표체재체계통.결과:이용소식역전록-취합매련반응확증방법능종성인기육조직내확증출1 188 bp적인골형성단백2전장cDNA기인,기측서결과현시여Genebank보도서렬완전상부.장확증서렬쌍매절후여pcDNA3.0재체상련접,경전영험증,능구건인골형성단백2전장기인적진핵표체계통.결론:소식역전록-취합매련반응확증방법능종성인기육조직내확증출인골형성단백2전장cDNA기인,병극륭구건진핵표체재체계통,위하일보기인조직공정인공골실험전정기출.
