食品科学
食品科學
식품과학
FOOD SCIENCE
2009年
1期
142-146
,共5页
吴序栎%杨志华%刘志刚%吴海强
吳序櫟%楊誌華%劉誌剛%吳海彊
오서력%양지화%류지강%오해강
鸡蛋%过敏原%基因克隆%表达%Gald3
鷄蛋%過敏原%基因剋隆%錶達%Gald3
계단%과민원%기인극륭%표체%Gald3
目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因并柃验其免疫活性.方法:提取鸡蛋的总RNA,采用RT-PCR方法扩增出目的基因片段,将其克隆入T载体中进行测序和分析.设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中进行诱导表达.通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE结合活性.结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3.基因开放阅读框为2118个碱基(包括终止密码子),编码705个氨基酸.该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000.表达产物经亲和层析纯化,用Western blotting方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性.结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3基因,该蛋白具有良好的免疫原性.
目的:剋隆錶達鷄蛋主要過敏原Gal d 3基因併柃驗其免疫活性.方法:提取鷄蛋的總RNA,採用RT-PCR方法擴增齣目的基因片段,將其剋隆入T載體中進行測序和分析.設計帶有酶切位點的特異性引物,採用RT-PCR穫得整箇短的開放閱讀框併將目的基因剋隆到大腸桿菌錶達載體pET-28a中進行誘導錶達.通過Ni2+親和層析柱對重組蛋白進行純化,採用免疫印跡(Western blotting)方法檢測其IgE結閤活性.結果:剋隆穫得瞭鷄蛋主要過敏原Gal d 3.基因開放閱讀框為2118箇堿基(包括終止密碼子),編碼705箇氨基痠.該序列編碼的蛋白等電點為6.5,相對分子質量約為76000.錶達產物經親和層析純化,用Western blotting方法檢測免疫學活性,目的蛋白具有良好的免疫原性.結論:成功地剋隆和錶達瞭鷄蛋主要變應原Gal d 3基因,該蛋白具有良好的免疫原性.
목적:극륭표체계단주요과민원Gal d 3기인병령험기면역활성.방법:제취계단적총RNA,채용RT-PCR방법확증출목적기인편단,장기극륭입T재체중진행측서화분석.설계대유매절위점적특이성인물,채용RT-PCR획득정개단적개방열독광병장목적기인극륭도대장간균표체재체pET-28a중진행유도표체.통과Ni2+친화층석주대중조단백진행순화,채용면역인적(Western blotting)방법검측기IgE결합활성.결과:극륭획득료계단주요과민원Gal d 3.기인개방열독광위2118개감기(포괄종지밀마자),편마705개안기산.해서렬편마적단백등전점위6.5,상대분자질량약위76000.표체산물경친화층석순화,용Western blotting방법검측면역학활성,목적단백구유량호적면역원성.결론:성공지극륭화표체료계단주요변응원Gal d 3기인,해단백구유량호적면역원성.
