CAJ | 학술논문

背景:由干细胞分化而来的胰岛样细胞存在数量少、胰岛素分泌量少以及能否达到临床移植要求等问题.目的:观察不同细胞因子组合对人脐血干细胞体外向胰岛样细胞诱导分化的影响.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-05/09在辽宁省血液中心输血医学研究所细胞研究中心完成.材料:脐血来源于足月分娩的健康产妇,由沈阳市德济医院提供.方法:密度梯度离心法体外分离人脐血单个核细胞,诱导1组首先以低糖DMEM培养液进行培养,添加20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子和20 μg/L表皮生长因子,培养成巢蛋白阳性细胞后改为高糖DMEM培养液,添加2%B27和10 mmol/L尼可酰胺.诱导2组直接以高糖DMEM培养液进行培养,添加20 mmol/L尼可酰胺、20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20 μg/L肝细胞生长因子、2%B27及0.1 mmol/Lβ-巯基乙醇.对照组只添加与诱导组相同的培养液,不加入任何细胞因子.主要观察指标:诱导分化后对贴壁细胞进行形态学观察、胰岛素抗体的细胞免疫荧光染色及双硫腙染色鉴定.结果:体外培养的人脐血干细胞通过细胞因子组合诱导后,可见散在的胰岛样细胞或成群的胰岛样细胞群,呈Insulin阳性反应.诱导1组细胞散在或成群分布,诱导2组则多为散在分布的胰岛样细胞,且细胞相对较小,几乎没有胰岛细胞团.双硫腙染色后诱导1组有少部分较大的胰岛样细胞呈阴性,诱导2组细胞均呈棕红色阳性表达,未诱导的对照组细胞呈阴性.结论:人脐血干细胞通过不同细胞因子组合诱导后具有向胰岛样细胞分化的潜能,但诱导1组中部分细胞可能是非胰岛索细胞,而诱导2组胰岛样细胞均一性较差,可能与胰岛细胞种类较多、大小不一有关.
배경:유간세포분화이래적이도양세포존재수량소、이도소분비량소이급능부체도림상이식요구등문제.목적:관찰불동세포인자조합대인제혈간세포체외향이도양세포유도분화적영향.설계、시간급지점:세포학체외대조관찰,우2007-05/09재요녕성혈액중심수혈의학연구소세포연구중심완성.재료:제혈래원우족월분면적건강산부,유침양시덕제의원제공.방법:밀도제도리심법체외분리인제혈단개핵세포,유도1조수선이저당DMEM배양액진행배양,첨가20 μg/L감성성섬유세포생장인자화20 μg/L표피생장인자,배양성소단백양성세포후개위고당DMEM배양액,첨가2%B27화10 mmol/L니가선알.유도2조직접이고당DMEM배양액진행배양,첨가20 mmol/L니가선알、20 μg/L감성성섬유세포생장인자、20 μg/L간세포생장인자、2%B27급0.1 mmol/Lβ-구기을순.대조조지첨가여유도조상동적배양액,불가입임하세포인자.주요관찰지표:유도분화후대첩벽세포진행형태학관찰、이도소항체적세포면역형광염색급쌍류종염색감정.결과:체외배양적인제혈간세포통과세포인자조합유도후,가견산재적이도양세포혹성군적이도양세포군,정Insulin양성반응.유도1조세포산재혹성군분포,유도2조칙다위산재분포적이도양세포,차세포상대교소,궤호몰유이도세포단.쌍류종염색후유도1조유소부분교대적이도양세포정음성,유도2조세포균정종홍색양성표체,미유도적대조조세포정음성.결론:인제혈간세포통과불동세포인자조합유도후구유향이도양세포분화적잠능,단유도1조중부분세포가능시비이도색세포,이유도2조이도양세포균일성교차,가능여이도세포충류교다、대소불일유관.