安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2009年
4期
437-442
,共6页
胡芳芳%陈乔尔%孙麟%何志良%祖谷
鬍芳芳%陳喬爾%孫麟%何誌良%祖穀
호방방%진교이%손린%하지량%조곡
舌肿瘤%癌,鳞状细胞%转染%基因疗法%细胞凋亡
舌腫瘤%癌,鱗狀細胞%轉染%基因療法%細胞凋亡
설종류%암,린상세포%전염%기인요법%세포조망
目的 研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础.方法 采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序.脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达.通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应.结果 PCR扩增后的产物在约1 008 bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段.经检测Fas基因转染能提高Fas mRNA 表达水平、Fas 蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数.Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01).Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径.MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组 Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性.软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低.结论 Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点.Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长.
目的 研究Fas基因轉染對舌鱗癌Tca8113細胞的體外抑製作用,構建Fas基因真覈錶達質粒pBK-Fas併將其轉導入舌鱗癌Tca8113細胞,為舌鱗癌的Fas基因治療提供實驗基礎.方法 採用RT-PCR反轉錄成cDNA擴增Fas基因全長,亞剋隆到真覈錶達載體pBK-CMV內,構建齣重組真覈錶達質粒pBK-Fas,酶切鑒定併測序.脂質體法將pBK-Fas轉染入Tca8113細胞,RT-PCR檢測Fas mRNA錶達及半定量分析,瓊脂糖凝膠電泳檢測Fas轉染細胞凋亡,流式細胞儀檢測Fas蛋白錶達.通過細胞生長麯線描記和軟瓊脂集落形成實驗研究Fas基因的體外抑瘤效應.結果 PCR擴增後的產物在約1 008 bp處齣現明顯的特異性條帶,重組質粒pBK-Fas經酶切和測序鑒定,錶明均含有大小正確的Fas基因片段.經檢測Fas基因轉染能提高Fas mRNA 錶達水平、Fas 蛋白錶達彊度,以及細胞凋亡指數.Fas基因轉染能提高Fas蛋白的錶達彊度,由轉染前的34.01±4.76上升到轉染後的55.72±7.33,差異有統計學意義(P<0.01).Fas轉染細胞株在Fas抗體作用下能夠有效啟動Fas介導的細胞凋亡途徑.MTT法檢測細胞增殖抑製率的結果顯示PBK-Fas轉染組 Tca8113細胞的增殖抑製作用最明顯,錶明Fas基因轉染能增加舌鱗癌Tca8113細胞的增殖抑製率,結果與細胞生長麯線測定(計數法)結果具有一緻性.軟瓊脂集落形成實驗結果顯示,與未轉染細胞相比,重組質粒轉染的Tca8113細胞群體倍增時間延長,剋隆形成能力降低.結論 Fas基因片段被成功插入真覈錶達載體pBK-Fas質粒的多剋隆位點.Fas基因轉染能有效的抑製體外培養的舌鱗癌Tca8113細胞的生長.
목적 연구Fas기인전염대설린암Tca8113세포적체외억제작용,구건Fas기인진핵표체질립pBK-Fas병장기전도입설린암Tca8113세포,위설린암적Fas기인치료제공실험기출.방법 채용RT-PCR반전록성cDNA확증Fas기인전장,아극륭도진핵표체재체pBK-CMV내,구건출중조진핵표체질립pBK-Fas,매절감정병측서.지질체법장pBK-Fas전염입Tca8113세포,RT-PCR검측Fas mRNA표체급반정량분석,경지당응효전영검측Fas전염세포조망,류식세포의검측Fas단백표체.통과세포생장곡선묘기화연경지집락형성실험연구Fas기인적체외억류효응.결과 PCR확증후적산물재약1 008 bp처출현명현적특이성조대,중조질립pBK-Fas경매절화측서감정,표명균함유대소정학적Fas기인편단.경검측Fas기인전염능제고Fas mRNA 표체수평、Fas 단백표체강도,이급세포조망지수.Fas기인전염능제고Fas단백적표체강도,유전염전적34.01±4.76상승도전염후적55.72±7.33,차이유통계학의의(P<0.01).Fas전염세포주재Fas항체작용하능구유효계동Fas개도적세포조망도경.MTT법검측세포증식억제솔적결과현시PBK-Fas전염조 Tca8113세포적증식억제작용최명현,표명Fas기인전염능증가설린암Tca8113세포적증식억제솔,결과여세포생장곡선측정(계수법)결과구유일치성.연경지집락형성실험결과현시,여미전염세포상비,중조질립전염적Tca8113세포군체배증시간연장,극륭형성능력강저.결론 Fas기인편단피성공삽입진핵표체재체pBK-Fas질립적다극륭위점.Fas기인전염능유효적억제체외배양적설린암Tca8113세포적생장.
