华南理工大学学报（自然科学版）
華南理工大學學報（自然科學版）
화남리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2010年
9期
138-141,146
,共5页
张少平%崔堂兵%陈亮%郭勇
張少平%崔堂兵%陳亮%郭勇
장소평%최당병%진량%곽용
枯草芽孢杆菌%豆豉纤溶酶%易错PCR%定向进化%筛选
枯草芽孢桿菌%豆豉纖溶酶%易錯PCR%定嚮進化%篩選
고초아포간균%두시섬용매%역착PCR%정향진화%사선
为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率( kcat)是野生型的2.57倍.
為提高豆豉纖溶酶的藥用價值,通過易錯PCR方法對來源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纖溶酶DFE基因進行突變併構建突變體文庫,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA對突變體文庫進行篩選.通過3輪易錯PCR最終穫得催化效率提高的突變酶mDFE3.序列分析錶明突變酶mDFE3基因髮生瞭6處堿基突變,其中4處突變髮生氨基痠取代,2處為同義突變;通過swiss-model repository模擬突變酶mDFE3的結構,顯示3箇突變氨基痠位于迴環結構上,1箇位于α螺鏇上;酶動力學測定結果錶明突變酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突變酶mDFE3的催化效率( kcat)是野生型的2.57倍.
위제고두시섬용매적약용개치,통과역착PCR방법대래원우Bacillus subtilis DC-12적두시섬용매DFE기인진행돌변병구건돌변체문고,이용저물H-D-Val-Leu-Lys-pNA대돌변체문고진행사선.통과3륜역착PCR최종획득최화효솔제고적돌변매mDFE3.서렬분석표명돌변매mDFE3기인발생료6처감기돌변,기중4처돌변발생안기산취대,2처위동의돌변;통과swiss-model repository모의돌변매mDFE3적결구,현시3개돌변안기산위우회배결구상,1개위우α라선상;매동역학측정결과표명돌변매mDFE3적Km치유0.58mmol/L강저지0.45mmol/L,돌변매mDFE3적최화효솔( kcat)시야생형적2.57배.
