生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2010年
9期
194-197
,共4页
金小宝%王婷婷%朱家勇%李小波%马艳%褚夫江%卢雪梅
金小寶%王婷婷%硃傢勇%李小波%馬豔%褚伕江%盧雪梅
금소보%왕정정%주가용%리소파%마염%저부강%로설매
家蝇%抗菌肤%Defensin%毕赤酵母%表达
傢蠅%抗菌膚%Defensin%畢赤酵母%錶達
가승%항균부%Defensin%필적효모%표체
拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性.采用限制性内切酶SacI将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至摇瓶,28℃条件下0.5%甲醇诱导表达,连续诱导培养4 d后,上清液进行Tricine-SDS-PAGE检测表达效果,并采用琼脂糖孔穴扩散法检测表达产物对大肠杆菌E.coli K12 D31的抑制作用.结果显示,家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中得到了成功表达,表达产物对大肠杆菌E.coli K12D31的生长有抑制作用.说明酵母系统适合抗菌肽的表达.
擬通過酵母繫統錶達傢蠅抗菌肽Defensin基因,併初步鑒定其抗菌活性.採用限製性內切酶SacI將分泌型重組錶達質粒pPIC9K/Defensin線性化後,運用氯化鋰轉化法將其轉入巴斯德畢赤酵母GS115中,行G418加壓篩選和PCR鑒定;所得暘性轉化子轉至搖瓶,28℃條件下0.5%甲醇誘導錶達,連續誘導培養4 d後,上清液進行Tricine-SDS-PAGE檢測錶達效果,併採用瓊脂糖孔穴擴散法檢測錶達產物對大腸桿菌E.coli K12 D31的抑製作用.結果顯示,傢蠅抗菌肽Defensin在畢赤酵母中得到瞭成功錶達,錶達產物對大腸桿菌E.coli K12D31的生長有抑製作用.說明酵母繫統適閤抗菌肽的錶達.
의통과효모계통표체가승항균태Defensin기인,병초보감정기항균활성.채용한제성내절매SacI장분비형중조표체질립pPIC9K/Defensin선성화후,운용록화리전화법장기전입파사덕필적효모GS115중,행G418가압사선화PCR감정;소득양성전화자전지요병,28℃조건하0.5%갑순유도표체,련속유도배양4 d후,상청액진행Tricine-SDS-PAGE검측표체효과,병채용경지당공혈확산법검측표체산물대대장간균E.coli K12 D31적억제작용.결과현시,가승항균태Defensin재필적효모중득도료성공표체,표체산물대대장간균E.coli K12D31적생장유억제작용.설명효모계통괄합항균태적표체.
